Preparación de Medios de Cultivo
Summary
TLDREn este video, Jorge Muñiz guía a través de la preparación de medios de cultivo en el laboratorio de microbiología. Explica la importancia de revisar la fecha de caducidad y la consistencia del medio, y proporciona detalles sobre el proceso de medición, pesaje, disolución y ajuste de pH. Además, aborda la clarificación del medio, su esterilización y la dispensación en diferentes recipientes. Finalmente, destaca la necesidad de técnicas asépticas y la homogeneización para incorporar ingredientes adicionales, resaltando la relevancia de estos métodos en la microbiología desde 1887.
Takeaways
- 😀 Jorge Muñiz, el presentador, agradece la participación en el canal y anuncia que se revisará una práctica de laboratorio sobre preparación de medios de cultivo.
- 🔬 Se realiza la práctica en el laboratorio de Microbiología e Inocuidad de Alimentos del Centro Universitario de Ciencias Exactas e Ingenierías.
- 🙏 Se agradece a la Dra. Ofelia Rodríguez García y a Dara Rodríguez Herrera por el apoyo en la realización de los videos.
- 📅 Es crucial revisar la fecha de caducidad y la consistencia del medio de cultivo antes de su preparación, ya que pueden afectar su eficacia.
- 🚫 Los medios de cultivo deben almacenarse en lugares secos y con las tapaderas bien cerradas para evitar la absorción de humedad.
- ✅ Se deben seguir las instrucciones del fabricante para la preparación correcta de los medios de cultivo.
- 📝 La bitácora es esencial para registrar información clave y garantizar la trazabilidad en el laboratorio.
- 🔄 La preparación de los medios de cultivo a menudo se basa en la preparación de un litro, y se deben realizar cálculos para ajustar la cantidad según sea necesario.
- 🧪 Los recipientes para la preparación deben ser del doble del volumen que se va a utilizar para evitar derrames y facilitar el manejo.
- 💧 Es importante medir el agua destilada con precisión y aflorar correctamente el menisco para evitar errores en la preparación.
- 🔄 La disolución del medio de cultivo debe hacerse lentamente y con agitación constante para evitar la formación de grumos y la inhalación de polvo.
Q & A
¿Qué es la preparación de medios de cultivo y por qué es importante?
-La preparación de medios de cultivo es el proceso de crear un ambiente que permita el crecimiento de microorganismos en un laboratorio. Es importante porque permite a los científicos estudiar y manipular microorganismos de manera controlada.
¿Cuáles son las condiciones adecuadas para almacenar los medios de cultivo?
-Los medios de cultivo deben almacenarse en lugares secos y con las tapaderas firmemente apretadas para evitar la absorción de humedad del ambiente.
¿Qué es la consistencia típica de los medios de cultivo y por qué es importante verificarla?
-La mayoría de los medios de cultivo se presentan como polvos finos o granulados. Es importante verificar su consistencia porque cambios en la textura pueden indicar que han perdido sus características, lo que podría afectar a los resultados de los cultivos.
¿Qué pasos se deben seguir para asegurar la trazabilidad de los medios de cultivo?
-Para asegurar la trazabilidad, se deben registrar en bitácoras la información del tipo de medio de cultivo, quién lo preparó, la fecha de preparación, el volumen, el uso, el lote y la fecha de caducidad.
¿Cómo se calcula la cantidad de medio de cultivo si se necesita una cantidad diferente a la referenciada en el fabricante?
-Si se necesita una cantidad diferente al litro referenciado, se deben hacer cálculos de ajuste utilizando análisis dimensional o una regla de tres.
¿Qué tipo de recipientes se recomiendan para preparar los medios de cultivo?
-Se recomiendan recipientes del doble del volumen que se va a utilizar, como matrazes de vidrio que puedan calentarse o botellines de vidrio, y también se pueden usar ollas de acero inoxidable con una probeta.
¿Cómo se debe medir el agua destilada para la preparación del medio de cultivo?
-Se debe medir el agua destilada utilizando un matraz y asegurándose de que el menisco se encuentre sobre la línea de medición, aproximando el volumen y luego agregando poco a poco para completarlo.
¿Qué precauciones se deben tomar al pesar el medio de cultivo?
-Es importante pesar el medio de cultivo lo más rápido posible para minimizar la exposición al ambiente y usar balanzas digitales para cantidades mayores a un gramo o balanzas analíticas para cantidades menores.
¿Cómo se debe disolver el medio de cultivo y por qué?
-Se debe disolver lentamente para evitar la desprendida de polvo y la formación de grumos, agitando constantemente para que el polvo se incorpore al líquido.
¿Cuál es el propósito de medir y ajustar el pH del medio de cultivo?
-Es necesario medir y ajustar el pH porque los medios de cultivo funcionan dentro de ciertos límites de pH, y el pH puede modificarse en función de la temperatura, por lo que se debe corregir si es necesario.
¿Qué es la clarificación y cómo se realiza en los medios de cultivo sólidos y semisólidos?
-La clarificación es el proceso de remover el agar que se ha quedado pegado en las paredes del recipiente. Se realiza cubriendo el matraz con papel aluminio y agitando vigorosamente el medio de cultivo sobre una fuente de calor.
¿Cómo se debe manejar el medio de cultivo una vez que se ha clarificado y antes de la esterilización?
-Una vez clarificado, se debe retirar de la fuente de calor y colocar en un trapo franela seco, permitiendo que disminuya su temperatura antes de ser dispensado en sus formas finales.
¿Qué se debe hacer si se necesita agregar ingredientes adicionales al medio de cultivo antes del vaciado?
-Si se necesitan ingredientes adicionales, se deben agregar con técnicas asépticas utilizando un mechero y materiales esterilizados, y luego homogeneizar el medio para incorporar completamente el ingrediente.
Outlines
🔬 Preparación de Medios de Cultivo en Laboratorio
Este párrafo introduce la práctica de laboratorio sobre preparación de medios de cultivo, destacando la importancia de revisar la fecha de caducidad y la consistencia del medio. Se menciona la necesidad de almacenar los medios de cultivo en condiciones secas y la revisión de las instrucciones del fabricante. Además, se enfatiza la importancia de la documentación para garantizar la trazabilidad en el laboratorio.
🧪 Procedimientos de Preparación y Cálculos
Se describen los pasos para realizar los cálculos necesarios para preparar los medios de cultivo, incluyendo la consideración de la cantidad de medio y agua requerida. Se sugiere el uso de bitácoras para registrar información clave y se explica cómo ajustar la cantidad de medio de cultivo si es necesario preparar más o menos del especificado en las instrucciones.
🌡 Mediciones y Ajustes de PH
En este párrafo se explica cómo medir y ajustar el pH de los medios de cultivo, teniendo en cuenta que el valor de pH puede cambiar con la temperatura. Se detallan los pasos para enjuagar la charola y disolver el medio de cultivo, así como las precauciones necesarias para evitar la inhalación de polvo y la formación de grumos.
🍲 Clarificación y Esterilización del Medio de Cultivo
Se describe el proceso de clarificación del medio de cultivo, incluyendo técnicas como agitar el medio sobre un mechero o en parrillas de termo agitación. Se mencionan las precauciones para evitar derrames y quemaduras, y se explica cómo monitorear el proceso de clarificación. También se anticipa la siguiente práctica sobre esterilización utilizando autoclaves.
🌐 Ajustes Finales y Consideraciones Especiales
Este párrafo cubre la homogeneización del medio de cultivo después de añadir ingredientes adicionales, como el ácido tartárico o la rifampicina. Se discuten técnicas de dispensación para diferentes tipos de medios de cultivo y se presentan consideraciones especiales para medios sensibles a la luz o que requieren la formación de un bisel. Finalmente, se hace un repaso histórico sobre la evolución de la microbiología y la importancia de los medios de cultivo en el laboratorio.
Mindmap
Keywords
💡Microbiología
💡Medios de cultivo
💡Inocuidad de alimentos
💡Doctora Ofelia Rodríguez García
💡Trazaibilidad
💡pH
💡Esterilización
💡Agar
💡Técnicas asépticas
💡Caja de Petri
Highlights
Introducción a la práctica de laboratorio sobre preparación de medios de cultivo.
Importancia de revisar la fecha de caducidad y la consistencia del medio de cultivo.
Revisión de grumos y cambios de color en el medio de cultivo como signos de deterioro.
Necesidad de almacenar los medios de cultivo en lugares secos y bien sellados.
Recomendaciones para la preparación de medios de cultivo según las instrucciones del fabricante.
Registro de información crítica en bitácoras para trazabilidad y sistemas de calidad.
Cálculos para preparar cantidades de medios de cultivo distintas al litro estándar.
Selección de recipientes adecuados para la preparación del medio de cultivo.
Medición precisa del agua destilada con un menisco correcto.
Añadido de tres cuartas partes del agua al recipiente y reservar el resto.
Pesaje preciso del medio de cultivo para evitar exposición prolongada al ambiente.
Disolución lenta del medio de cultivo para evitar inhalación de polvo y formación de grumos.
Enjuague de la charola para no desperdiciar el medio de cultivo utilizado.
Medición y ajuste del pH del medio de cultivo para cumplir con los límites especificados.
Clarificación del medio de cultivo para remover el agar y otros componentes no deseados.
Utilización de papel aluminio y orificios para reducir la evaporación y controlar la presión.
Agitación constante durante la clarificación para prevenir la precipitación y la quema del medio.
Reponer el agua perdida durante la clarificación para mantener la integridad del medio.
Esterilización del medio de cultivo a través del autoclave y monitoreo de la temperatura.
Dispensación del medio de cultivo en cajas petri estériles y solidificación en superficies planas.
Adición de ingredientes específicos al medio de cultivo antes del vaciado y homogeneización.
Importancia de la técnica aséptica y la utilización de materiales esterilizados en la adición de ingredientes.
Revisión de casos particulares y ajustes en la preparación de medios de cultivo.
Historia de la microbiología y el uso de medios de cultivo desde 1887.
Conclusión de la práctica y agradecimiento por la atención y aprendizaje compartido.
Transcripts
hola qué tal muy buenos días yo soy
jorge muñiz muchas gracias por estar
aquí otra vez en el canal hoy vamos a
revisar una práctica de laboratorio
acerca de la preparación de medios de
cultivo una vez más acudimos al
laboratorio de microbiología e inocuidad
de alimentos del centro universitario de
ciencias exactas e ingenierías para
llevar a cabo este procedimiento un
agradecimiento muy especial a la doctora
ofelia rodríguez garcía por permitirnos
acudir a las instalaciones a hacer estas
prácticas y al acuerdo darle arena
rodríguez herrera por apoyarnos durante
la realización de estos vídeos vamos a
verlos
[Música]
para iniciar con la preparación de los
medios de cultivo debemos revisar la
fecha de caducidad indicada en el frasco
además debemos verificar la consistencia
que especifica el fabricante la mayoría
de los medios de cultivo se presentan
como polvos finos o granulado
es muy importante hacer estas dos
revisiones en ocasiones algunos medios
que han sido almacenados en condiciones
inadecuadas podrían perder sus
características a pesar de encontrarse
en la fecha de caducidad revisemos por
ejemplo este medio de cultivo podemos
notar la aparición de grumos
[Música]
en este otro que caducó desde el 2007
podemos notar cambios en el color y
además la textura nos muestra que ha
absorbido humedad
recuerden que los medios de cultivo son
microscópicos es decir tienden a
absorber humedad del ambiente por lo
tanto deben almacenarse en lugares secos
y siempre con las tapaderas firmemente
apretadas
[Música]
también es importante revisar las
instrucciones del fabricante para
conocer si existen particularidades en
el modo de preparación
ahora procederemos con la realización de
cálculos para eso tenemos bitácoras
donde registramos la información los
datos más importantes que suelen
registrarse es el tipo de medio de
cultivo quien lo preparó la fecha de
preparación el volumen el uso el lote la
fecha de caducidad entre otros es muy
importante que complete en los registros
para poder llevar a cabo una adecuada
trazabilidad en caso de que sea
necesario además recuerden que el
sistema de documentación es uno de los
componentes de los sistemas de calidad
que llevamos en el laboratorio
las indicaciones de preparación que se
especifican en los medios de cultivo
suelen estar referenciados a la
preparación de un litro si ustedes
necesitan preparar una cantidad mayor o
menor deberán hacer los cálculos para
ello podrán resolverlo con un sencillo
análisis dimensional o una regla de tres
[Música]
ahora es momento de buscar los
recipientes estos deben ser del doble
del volumen que vamos a utilizar por
ejemplo yo prepararé 200 mililitros por
lo tanto necesito un matraz de 500
mililitros o más puede prepararse en
matraz de vidrio que pueda calentarse o
en éstos botellines también de vidrio
para calentar incluso en algunas ollas
de acero inoxidable
con una probeta vamos a medir la
cantidad de agua destilada que vamos a
necesitar es muy importante que
recuerden aflorar la correctamente el
menisco debe encontrarse sobre la línea
de medición recuerden aproximar el
volumen y después agregar poco a poco
para completarlo
una vez que tenemos el volumen medido
vamos a agregar tres cuartas partes al
recipiente donde vamos a preparar el
vídeo de cultivo y vamos a reservar el
resto
[Aplausos]
[Música]
procederemos ahora a pesar el medio de
cultivo podemos utilizar balanzas
digitales siempre y cuando la cantidad
sea mayor a un gramo si fuera menor a un
gramo
debemos utilizar balanza analítica
colocamos la charola sobre el disco de
pesado y la tara moss
procedemos entonces a pesar directamente
la cantidad que vamos a necesitar
recuerden hacerlo lo más rápido posible
para que el medio de cultivo esté
expuesto a la humedad del ambiente el
menor tiempo
algunos errores que comúnmente se
cometen durante esta etapa estirar medio
de cultivo mientras estamos pensando o
hacerlo muy bruscamente y levantar
polvos que podamos inhalar recuerden que
algunos medios de cultivo tienen
componentes tóxicos
[Música]
procederemos ahora a disolver el medio
de cultivo
recuerden hacerlo lentamente para evitar
que se desprenda una gran cantidad de
polvo que ustedes puedan inhalar y
también prevendrán una formación de
grumos agiten constantemente para
facilitar que todo el polvo se vaya
incorporando en el líquido
[Música]
el medio de cultivo remanente en la
charola estuvo considerado en el pesado
por lo tanto debemos enjuagar la con el
resto del agua destilada
[Música]
i
podemos aprovechar también esta etapa
para remover la mayor cantidad del medio
de cultivo que se haya quedado adherido
a las paredes esto lo haremos durante el
vaciado del resto del agua destilada
favoreciendo el arrastre
[Música]
los medios de cultivo funcionan dentro
de ciertos límites de ph por lo tanto
debemos hacer la medición con un
potenciómetro y en caso de ser necesario
llevar a cabo un ajuste
[Música]
recuerden que el valor de ph se modifica
en función de la temperatura por lo
tanto la mejor práctica es utilizar
también un medidor de temperatura para
poder llevar a cabo la corrección en el
valor de ph
[Música]
en este caso el medio de cultivo quedó
con un valor inferior al especificado
por el fabricante por lo tanto
corresponde llevar a cabo un ajuste
[Música]
si necesitamos significar el medio
podemos emplear soluciones de ácido
clorhídrico uno normal en este caso que
necesitamos alcalinizar lo emplearemos
una solución de hidróxido de sodio uno
normal esta etapa debe llevarse a cabo
poco a poco y con paciencia colocamos
unas gotas de la solución agitamos y
verificamos el valor de ph
de no hacerlo así podemos provocar
cambios muy bruscos en el valor de ph lo
que conllevaría a un cambio de algunos
nutrientes que pudiese ser irreversible
por ejemplo podríamos desnaturalizar
proteínas cuando a significamos
demasiado el medio y cuando hacemos el
ajuste y lo regresamos a la neutralidad
las proteínas no van a renaturalizar sé
los pasos que siguen van a ser un poco
diferentes en función de la consistencia
del medio de cultivo que estemos
preparando en el caso de los medios
sólidos y semisólidos que contienen 1
por ciento y 0.5 por ciento de agar
respectivamente la etapa siguiente se
llama clarificación en el caso de los
medios líquidos que no contienen agar ya
está listo para dispersarse en tubos de
ensayo o botellines según como lo
vayamos a utilizar y llevarlo a
esterilización si es un líquido que no
se esteriliza entonces debería
dispensarse en tubos o botellines
previamente esterilizados
para clarificar vamos a cubrir nuestro
matraz con un papel aluminio para
reducir la cantidad de agua que pierde
el medio de cultivo por evaporación se
recomienda hacer un pequeño orificio
para que se libere algo de presión
debido a que el medio de cultivo podría
proyectarse durante esta etapa
una manera de clarificar es hacerlo
directamente en el mechero con una tela
de asbesto en este caso debemos agitar
vigorosamente el medio de cultivo y
colocarlo sobre la fuente de calor
observamos mientras el medio de cultivo
esté en movimiento lo vamos a dejar ahí
una vez que se detuvo vamos a agitar una
vez más para prevenir que el medio se
precipite y se queme vamos a estar
repitiendo esto hasta que el medio esté
clarificado
[Música]
cuando el medio de cultivo se clarifica
en una olla debemos cubrir la mayor
cantidad de la superficie con papel
aluminio dejando un espacio para el
agitarlo
debemos colocar una marca del volumen
inicial del medio de cultivo cuando
clarificamos en ollas suele perderse una
gran cantidad de agua la cual debe
reponerse al terminar la clarificación
[Música]
otra manera de hacer esta etapa es en
parrillas de termo agitación vamos a
utilizar esos agitadores magnéticos y lo
vamos a colocar en el matraz deslicen lo
por una pared para evitar que golpea el
fondo después cubrimos el matraz y lo
colocamos directamente en la fuente de
calor ajustamos los controles para la
agitación y el calentamiento recuerden
siempre tener cerca un trapo franela
seco para que una vez que el medio esté
listo lo coloquen sobre ella y no lo
pongan directamente en la mesa porque
está fría colocar el matraz caliente
sobre una mesa fría puede provocar que
el vidrio se rompa y tengamos un
accidente
[Música]
debemos vigilar el medio de cultivo
durante todo el tiempo de clarificación
existen algunas señales que nos hacen
saber que el proceso está progresando
[Música]
primeramente notaremos la formación de
una gran cantidad de condensación dentro
del matraz las gotas resbalan por las
paredes y ayudarán a remover el agar que
hubiese quedado pegado en ellas
[Música]
después el medio de cultivo se tornará
más claro y comenzará a desarrollarse
espuma en la superficie estamos a pocos
segundos de que entre en ebullición
debemos estar atentos para en cuanto
ocurra este proceso lo retiremos de la
fuente de calor y lo coloquemos en el
trapo seco que tenemos a un lado
colocaremos el más atrás de manera
inclinada sobre el trapo seco que
tenemos a un lado de la fuente de calor
esto permitirá prevenir accidentes por
posibles derrames
cuando nos excedemos con el
calentamiento el medio de cultivo va a
tener un comportamiento parecido a la
leche oa la gelatina cuando el bulli es
decir va a subir si tenemos el matraz en
posición vertical es muy probable que
ocurra un derrame si lo colocamos en
posición inclinada subirá pero quedará
contenido en una de las paredes de alma
atrás es muy importante hacer esto con
mucho cuidado porque es muy caliente
causa quemaduras muy graves
siempre hay que inclinarlo si de todas
maneras nos excedimos en el
calentamiento aunque lo inclinemos se va
a derramar por lo tanto siempre dirijan
el matraz hacia un sitio donde no se
encuentren compañeros para prevenir
accidentes
después vamos a permitir que el medio de
cultivo disminuya su temperatura en el
caso de este xl de que está aquí no se
esteriliza vamos a permitir que baje
aproximadamente a 50 grados antes de
dispensar lo en las cajas vamos a
monitorear la temperatura con un
termómetro infrarrojo en el caso de los
medios que si se esterilizan vamos a
esperar a que baje aproximadamente a 60
grados centígrados y lo vamos a
dispensar ya sea en botellines o en
tubos de ensayo según como lo vayamos a
utilizar le colocamos sus indicadores de
esterilidad y los colocamos en el
autoclave
en la práctica posterior a esta vamos a
revisar cómo esterilizar medios de
cultivo y materiales utilizando calor
húmedo es decir a través de las
autoclaves
[Música]
cuando los medios de cultivo terminan su
ciclo esterilización vamos a sacarlos y
esperar a que baje la temperatura
aproximadamente a 50 grados para
dispensarlos en su forma final
por ejemplo este medio va en cajas una
vez que la temperatura disminuyó vamos a
vaciarlo en cajas petri estériles
vamos a flamear la boquilla del mechero
y vamos a dispensar el agar en un solo
punto hasta que se cubran
aproximadamente tres cuartas partes de
la caja en este caso nosotros
necesitamos que la cantidad de agar sea
aproximada pero cuando ustedes necesiten
una cantidad exacta de agar van a tener
que dispensar lo con pipetas las cuales
claramente tendrán que ser pipetas
estériles
[Música]
después permitiremos que las cajas
solidifique en una superficie plana
[Música]
cuando el medio de cultivo esté
solidificado daremos vuelta a las cajas
siempre deben manipularse de esta manera
para prevenir que el agua de
condensación de la tapadera que pudiese
formarse caiga sobre la superficie del
lagar y arruine el cultivo cuando son
múltiples cajas pueden apilarse de esta
forma y después colocarse en bolsas para
guardarse en el refrigerador
aquí tenemos una caja de petri que se
llenó con una cantidad excesiva de agar
no afecta directamente al cultivo pero
no es necesario desperdiciar tanto medio
de este lado vemos que en esta caja se
coloca una cantidad muy pobre de agua
esto se afecta el desarrollo porque
durante la incubación va a deshidratarse
de este lado observamos una caja que se
colocó en una superficie inclinada
durante la solidificación esto afectará
al cultivo en las porciones más delgadas
[Música]
ahora vamos a revisar algunos casos
particulares a veces necesitamos
adicionar ingredientes antes del vaciado
por ejemplo el ácido tartárico en el
lagar papa dextrosa o en este caso la
rifampicina en el a st con rifampicina
obsérvese como esto debe hacerse
cuidando la técnica aséptica porque el
medio de cultivo ya está estéril se hace
con un mechero y con materiales
previamente esterilizados
[Música]
[Música]
[Aplausos]
[Música]
[Música]
después de la visión de estas sustancias
es muy importante homogeneizar el medio
de cultivo para garantizar que el
reactivo el ingrediente se incorpore
totalmente
[Música]
noten la técnica que aplica mi colega
ramón garcía frutos como debe dispensar
múltiples cajas lo hace de manera
apilado también en esta forma las coloca
para solidificación de este modo ahorra
tiempo y espacio
[Música]
estos hogares se dispensaron en tubos de
ensayo previo a la esterilización y una
vez que salieron se colocaron de manera
inclinada
esto es para que solidifiquen y
adquieran la formación de un bisel en el
caso de estas pruebas bioquímicas es muy
importante
lo mismo aplica para estos viales que
serán utilizados para guardar bacterias
en varios requerimos la formación de
este bisel para generar una biomasa
los medios sensibles a la luz deberán
solidificar se cubiertos en papel de
estraza
[Música]
antes de la esterilización algunos
líquidos deben ser adición a dos de
estas campanas surjan para ver la
producción de gas pueden notar en este
medio ahí se encuentra la campana durham
si la bacteria se gas capturaremos las
burbujas ahí que está interesante la
microbiología como ciencia avanzó
gracias a el uso del microscopio y a la
utilización de medios de cultivo es muy
importante que ustedes aprendan cómo
llevarlos a cabo para poder desarrollar
cultivos en el laboratorio adecuadamente
máquinas de cuánto tiempo tiene de uso
esto desde 1887 cuando se combinó el uso
del agarre los medios de cultivo con la
utilización de cajas petri hasta la
fecha lo seguimos utilizando será que
funciona
muchas gracias por haber estado aquí
espero la información haya sido de
utilidad y nos vemos en la siguiente
oportunidad
Посмотреть больше похожих видео
5.0 / 5 (0 votes)