HPLC Fundamentos (Fase normal y Fase reversa)

Summary

El script explica la cromatografía líquida de alta presión (HPLC), una técnica de separación y análisis químico. Se describen las fases normal y reversa, donde la interacción entre la fase móvil y estacionaria determina la separación de compuestos. La fase estacionaria en HPLC suele ser no polar (C18), y la fase móvil polar, lo que favorece la retención de compuestos polares. Se mencionan detectores específicos y la importancia de la polaridad en la separación de componentes químicos.

Takeaways

• 🌐 La cromatografía es una técnica de separación que puede utilizarse para separar prácticamente cualquier tipo de muestra.
• 🔄 La fase normal y la fase reversa son dos modos principales de cromatografía líquida que se diferencian en la polaridad de las fases móvil y estacionaria.
• 🚀 La HPLC (alta presión liquid chromatography), también conocida como cromatografía de alta resolución, utiliza presión para mejorar la separación y resolución de las muestras.
• 🧪 La automatización de la cromatografía ha permitido una separación más rápida y precisa de componentes en una muestra.
• 📊 Los picos en un cromatógrafo representan compuestos químicos separados, y su altura indica la concentración del compuesto.
• 🔬 La elección del detector en cromatografía depende del tipo de compuestos que se desean identificar y cuantificar.
• 💧 La fase móvil en la cromatografía puede variar en polaridad para controlar la selectividad y la eficiencia de la separación.
• 🧲 En la fase normal, la fase estacionaria es polar y la fase móvil no polar, lo que favorece la retención de compuestos polares.
• 🔀 En la fase reversa, la fase estacionaria es no polar y la fase móvil polar, lo que resulta en la retención de compuestos no polares.
• 📈 La cromatografía en fase reversa es la más comúnmente utilizada y permite un mayor control sobre la separación de compuestos a través de la composición de la fase móvil.

Q & A

¿Qué es la cromatografía y cómo se relaciona con la fase normal y la fase reversa?

La cromatografía es una técnica analítica que se utiliza para separar componentes de una muestra. La fase normal y la fase reversa son dos modos de cromatografía donde la polaridad de la fase móvil y la fase estacionaria es diferente. En la fase normal, la fase estacionaria es polar y la fase móvil no polar, mientras que en la fase reversa, la fase estacionaria es no polar y la fase móvil es polar.

¿Qué significan las siglas HPLC y cómo evolucionaron?

HPLC significa 'High Pressure Liquid Chromatography' (cromatografía de alta presión de líquidos). Originalmente, se refería a la cromatografía de alta presión debido al uso de presiones para empujar la fase móvil a través de la columna. Sin embargo, con el tiempo, la tecnología evolucionó y las siglas comenzaron a representar 'High Performance Liquid Chromatography' (cromatografía de alta resolución de líquidos), indicando un enfoque en la resolución y rendimiento del método.

¿Por qué en HPLC no se utilizan columnas de vidrio?

En HPLC no se utilizan columnas de vidrio debido a que las altas presiones que se aplican para hacer fluir la fase móvil podrían romper el vidrio. Por lo tanto, se prefieren columnas de acero u otros materiales resistentes.

¿Qué es un cromatógrafo y qué función cumple?

Un cromatógrafo es el instrumento que utiliza el principio de la cromatografía para realizar separaciones automáticas. Su función principal es la separación, identificación y cuantificación de componentes en una muestra.

¿Qué representan los picos en un cromatógrafo?

Los picos en un cromatógrafo representan a los compuestos químicos que han sido separados dentro de la columna. Cada pico indica la presencia de un compuesto específico, y su altura puede estar relacionada con la concentración de ese compuesto en la muestra.

¿Cuáles son las tres etapas principales del proceso cromatográfico instrumental?

Las tres etapas principales del proceso cromatográfico instrumental son: 1) inyección de la muestra, 2) proceso de separación dentro de la columna y 3) detección y análisis de los componentes separados.

¿Qué es un detector en cromatografía y cómo funciona?

Un detector en cromatografía es un dispositivo que recibe los componentes que salen de la columna y transforma la información química de estos componentes en señales que luego se interpretan como picos en el cromatógrafo. La elección del detector depende del tipo de compuestos que se quieren detectar.

¿Qué es la fase estacionaria y cómo se relaciona con la fase móvil en la cromatografía?

La fase estacionaria es la que permanece en su lugar durante la separación, y es con la que interactúan los componentes de la muestra. La fase móvil es la que pasa por la columna y lleva consigo a los componentes de la muestra. La interacción entre la fase estacionaria y los componentes de la muestra, junto con la fase móvil, determina la separación de los compuestos.

¿Cómo se selecciona la fase móvil en la cromatografía y cuál es su importancia?

La fase móvil se selecciona basándose en la naturaleza de los compuestos que se desean separar. Es crucial porque su polaridad y composición pueden influir en la separación y la resolución de los componentes. La fase móvil puede ser modificada para mejorar la eficiencia de la separación.

¿Qué es el tiempo de migración y cómo se determina?

El tiempo de migración es el tiempo que tarda un compuesto en pasar por la columna desde el momento de la inyección hasta que es detectado. Se determina observando el pico correspondiente al compuesto en el cromatógrafo.

¿Cómo se pueden mejorar las separaciones en cromatografía?

Las separaciones en cromatografía pueden mejorarse modificando la composición de la fase móvil, cambiando la naturaleza de la fase estacionaria, ajustando las condiciones de la fase móvil (como su polaridad), o seleccionando una columna más adecuada para los compuestos específicos que se desean separar.

Outlines

00:00

🌟 Introducción a la Cromatografía Líquida de Alta Presión

El primer párrafo introduce la cromatografía, enfocándose en la diferencia entre la fase normal y la fase reversa. Se explican las siglas 'HPLC', que significan Cromatografía Líquida de Alta Presión, y cómo se ha evolucionado para representar Cromatografía Líquida de Alta Resolución. Se menciona que en HPLC se utilizan columnas de acero en lugar de vidrio debido a las altas presiones que se aplican. Además, se describe el proceso de separación y se menciona que el instrumento utilizado es un cromatógrafo, que automatiza el proceso de separación y permite la identificación y cuantificación de compuestos químicos.

05:00

🔎 Proceso de Cromatografía y Detección de Componentes

El segundo párrafo detalla los pasos del proceso cromatográfico, que incluyen la inyección de la muestra, el proceso de separación dentro de la columna y la detección. Se destaca la importancia de la automatización en la disminución del tiempo de separación y se menciona la variedad de detectores disponibles, cada uno específico para diferentes tipos de análisis. Se ilustra cómo la interacción entre la fase móvil y la fase estacionaria provoca la separación de los componentes de la muestra.

10:02

📊 Modos de Cromatografía: Fase Normal y Fase Reversa

Este párrafo explora los dos modos principales de cromatografía: la fase normal y la fase reversa. Se describe cómo en la fase normal, la fase estacionaria es polar y la fase móvil no polar, lo que favorece la retención de compuestos polares. En cambio, en la fase reversa, la fase estacionaria es no polar y la fase móvil es polar, lo que resulta en la retención de compuestos no polares. Se mencionan ejemplos de fases móviles y estacionarias y se explica cómo la naturaleza de estos componentes afecta la separación.

15:03

🔬 Detalles de los Detectores y la Separación de Compuestos

El cuarto párrafo se enfoca en los detectores utilizados en la cromatografía y cómo funcionan para detectar y medir compuestos específicos. Se menciona un detector UV a 280 nanómetros y cómo los compuestos químicos son registrados como picos en el cromatógrafo. Además, se discute la diferencia entre la fase normal y la fase reversa en términos de la retención de compuestos polares y no polares, respectivamente.

20:03

🌡 Control de Selectividad en la Cromatografía

Este párrafo explica cómo se controla la selectividad en la cromatografía a través de la composición de la fase móvil. Se sugiere que cambiar la polaridad de la fase móvil puede ayudar a mejorar la separación de los componentes. Se presentan ejemplos de cómo se puede modificar la fase móvil para lograr una mejor separación y se menciona la importancia de la fase estacionaria en la separación de compuestos.

25:09

🌀 Fase Estacionaria y Animación de Proceso Cromatográfico

El sexto y último párrafo habla sobre la fase estacionaria en la cromatografía, mencionando la fase C18 como un ejemplo común de fase estacionaria no polar. Se describen los compuestos benzopireno y sulfato de tilo para ilustrar cómo la naturaleza polar o no polar de un compuesto afecta su tiempo de retención en la columna. Finalmente, se presenta una animación para resumir el proceso de la cromatografía en fases normal y reversa.

Keywords

💡cromatografía

Cromatografía es una técnica analítica que utiliza la separación de componentes de una mezcla a través de su interacción diferencial con dos fases: una fase móvil y una fase estacionaria. En el vídeo, se discute cómo la cromatografía se ha desarrollado y se centra en dos tipos específicos: la fase normal y la fase reversa, que son métodos clave para la separación y análisis de compuestos químicos.

💡fase normal

La fase normal de la cromatografía es un método donde la fase estacionaria es polar y la fase móvil no polar. Esto significa que los compuestos polares tienden a interactuar más con la fase estacionaria y, por lo tanto, se retienen más en la columna. En el vídeo, se menciona que en la fase normal, los compuestos no polares se eluyen primero.

💡fase reversa

La fase reversa es un tipo de cromatografía donde la fase estacionaria es no polar, comúnmente modificada con grupos C18, y la fase móvil es polar, generalmente agua con添加剂. Esto resulta en una mayor retención de compuestos no polares en comparación con los compuestos polares. El vídeo destaca que la fase reversa es el método más utilizado en la cromatografía.

💡HPLC

HPLC (alta presión liquido cromatografía) es un término mencionado en el vídeo que hace referencia a un método cromatográfico de alta resolución que utiliza presión para empujar la fase móvil a través de la columna. HPLC ha evolucionado para no solo implicar alta presión, sino también alta resolución en la separación de componentes.

💡detector

Un detector en cromatografía es un dispositivo que identifica y cuantifica los componentes de una muestra una vez que han pasado por la columna. El vídeo menciona varios tipos de detectores, como los basados en la absorción UV, los diodos de arreglo y los detectores de índice de refracción, que son esenciales para la identificación y cuantificación de compuestos en la salida de la columna.

💡compuestos químicos

Los compuestos químicos son las sustancias analizadas en la cromatografía. El objetivo es separar estos compuestos en una muestra para su identificación y cuantificación. En el vídeo, se discute cómo los compuestos interactúan con las fases estacionaria y móvil, lo que determina su tiempo de retención y, por ende, su separación.

💡柱子

La columna es el componente central de un cromatógrafo que contiene la fase estacionaria. En el vídeo, se describe cómo la columna puede ser de vidrio en métodos de cromatografía de gravedad y de acero en HPLC debido a las altas presiones involucradas. La columna es donde ocurre la separación de los compuestos.

💡presión

La presión en HPLC se refiere a la fuerza aplicada a la fase móvil para acelerar su flujo a través de la columna. El vídeo explica que la presión es un factor crítico en HPLC que permite una separación más rápida y eficiente de los compuestos en la muestra.

💡picos

Los picos en un cromatógrafo representan a los compuestos químicos que se han separado y son detectados al salir de la columna. Cada pico en el gráfico de cromatografía corresponde a un compuesto específico en la muestra, como se describe en el vídeo al explicar cómo los picos se relacionan con los componentes de la muestra.

💡separación

La separación es el proceso fundamental de la cromatografía, donde los componentes de una mezcla se dividen en la columna. El vídeo destaca la importancia de la separación en la cromatografía, ya sea a través de la fase normal o la fase reversa, y cómo se logra a través de la interacción diferencial con las fases móvil y estacionaria.

💡interacción selectiva

La interacción selectiva es el principio por el cual los compuestos en una muestra interactúan de manera diferente con la fase estacionaria y la fase móvil en la cromatografía. El vídeo menciona que esta interacción es clave para la separación de componentes en la columna y que puede variar según la naturaleza polar o no polar de las fases.

Highlights

Introducción al tema de cromatografía y sus fundamentos.

Explicación de las fases en cromatografía: fase normal y fase reversa.

Mencion de las siglas HPLC y su significado en cromatografía.

Diferenciación entre cromatografía de alta presión y de alta resolución.

Importancia de las columnas de acero en HPLC debido a las altas presiones.

Función del cromatógrafo y su rol en la separación y análisis de compuestos.

Proceso de inyección de muestra y su papel en la cromatografía.

Descripción del proceso de separación dentro de la columna cromatográfica.

Importancia de la detección en la identificación y cuantificación de compuestos.

Evolución de la cromatografía líquida de alta resolución y su impacto en la separación de componentes.

Función de la fase móvil y su interacción con la fase estacionaria en la separación de compuestos.

Diferenciación entre fase normal y fase reversa en términos de polaridad.

Explicación de la retención de compuestos polares en fase normal y no polares en fase reversa.

Importancia de la fase móvil en la selectividad de la separación en cromatografía.

Descripción de la fase estacionaria en cromatografía y su rol en la separación de compuestos.

Mencion de la fase estacionaria C18 y su aplicación en la cromatografía de fase reversa.

Comparación entre la cromatografía en fase normal y en fase reversa en términos de retención de compuestos.

Importancia de la modificación química de la fase estacionaria para obtener polaridad en cromatografía normal.

Resumen de la presentación y créditos al canal de YouTube 'Mister Simple Science' por la animación didáctica.

Transcripts

hola que tal continuando con el tema de

cromatografía vamos a ver en esta

ocasión lo que es el fundamento

instrumental y las fases que se conocen

en cromatografía las cuales son

comúnmente denominadas como fase normal

y fase reversa

bien dentro de la cromatografía existen

unas siglas que son ampliamente

conocidas las cuales se denominan h plc

nosotros en el análisis químico cuando

encontramos estas letras sin estas

siglas hacemos referencia inmediatamente

que se trata de un método cromatográfico

estas siglas son del inglés high

pressure liquid chromatography el cual

surgió en un inicio es decir

fotografía líquida de alta presión que

nos indica esto que utilizamos ya no

solamente la ilusión de la fase móvil

por medio de la fuerza de gravedad sino

que se está aplicando una presión chill

a esa fase móvil para hacerla fluir

dentro de la columna en temas anteriores

les había comentado que tenía un

limitante es el uso de columnas de

vidrio en este caso de la h plc no se

utilizan columnas de vidrio debido a que

si se utilizan presiones altas se

quiebra dicho material

entonces las columnas acá que se

utilizan son columnas normalmente de

acero

bien esas siglas de h plc surgen como

una cromatografía líquida de alta

resolución actualmente conforme ha

avanzado la instrumentación y también la

tecnología evidentemente se hace

referencia a que ya no es cromatografía

líquida de alta presión sino

cromatografía líquida de alta resolución

es decir high performance la p ya no nos

representa presión sino nos representa

un performance una resolución y lo que

observamos aquí en esta imagen es un

claro claro ejemplo de el instrumento

que se le conoce como cromatógrafo bien

ese cromatógrafo como tal es el

instrumento que utiliza el fundamento de

toda la cromatografía pero ya utilizando

partes instrumentales y de tal forma que

se automatiza

y dentistas separaciones en primer lugar

no olvidemos que el proceso

cromatográfico es el primer en primera

instancia un proceso de separación y ya

posteriormente podemos hacer una

identificación y cuantificación

el equipo entonces se llama cromatógrafo

y el gráfico que nosotros obtenemos de

un cromatógrafo se denomina cromatógrafo

y veremos algunos ejemplos de prometo

grama en nuestra sesión aquí en la

figura observamos un cromatógrafo el

cual nos está dando el el formato back

dentro de él observamos algunos picos

nosotros identificamos aquí unos picos

vamos a hablar también de que

representan estos picos en verdad

esos picos son compuestos químicos que

están separados dentro de la columna

entonces bueno

la instrumentación de la cromatografía

surge en el momento que se le aplicó

presión a las columnas para que pudieran

efectuarse una separaciones más rápidas

y con mejor resolución ahí surge la

cromatografía líquida de alta resolución

y que comúnmente ustedes lo van a

encontrar en todas las fuentes que

consulten como hp lc que actualmente

haciendo un resumen h plc quiere decir

que mató grafía líquida de alta

resolución aunque en un inicio hacía

referencia a que era de alta presión

porque porque se aplicaba con diversos

partes como bombas la presión dentro de

la columna para favorecer la resolución

bien en esta diapositiva observamos una

figura la cual nos hace referencia a

unas columnas

no tenemos que olvidar nunca que la

cromatografía es esencialmente técnica

de separación

ok que nos puede separar prácticamente

todo obtenemos muy pocas limitantes de

las cuales no podemos separar nosotros

por medio de una columna cromatografía

cómo se separan ya hemos visto a través

de interacciones selectivas entre la

muestra y con la fase estacionaria

cuando se hace pasar una fase móvil a

través de ellos

este proceso cromatográfico ha sido

mejorado debido a la automatización de

esa automatización nos favorece la

separación de componentes disminuye

también el tiempo de separación un

proceso cromatográfico instrumental y es

decir utilizando ya equipos son

instrumentos lo podemos resumir en tres

etapas la primera que va a ser la

inyección de la muestra ok la segunda

etapa la cual va a ser el proceso de

separación

y ese proceso de separación donde se

efectúa dentro de la columna

finalmente la etapa

es de detección ok con la cual nosotros

podemos identificar y en sesiones

posteriores veremos cómo cuantificar

cada uno de estos compuestos que se sepa

entonces bueno en esta imagen que es lo

que observamos una muestra que se

inyecta dentro de la columna y simula

ser una muestra con coloración morada no

para fines pedagógicos nada más después

que va a pasar ya que está la muestra

dentro de la columna vamos a hacer pasar

una fase móvil y la interacción entre

esa fase móvil con la muestra y la fase

estacionaria va a provocar que existan

separaciones de los componentes de la

muestra

en esta figura conforme conforme

avanzamos a la derecha observamos que se

empiezan

a separar componentes individuales que

están presentes en la muestra

para que finalmente

el huyan es decir

van a salir de la columna y por medio de

un instrumento también vamos a ver

después qué instrumentos son que este

componente es perdón del instrumento son

que se conocen como detectores hay

diversos tipos de detectores no existe

un detector universal depende de lo que

nosotros queramos cuantificar es el

detector que vamos a utilizar de forma

general si queremos detectar a sus pares

pues es un detector específico en

comparación con si queremos detectar

polifenoles antioxidantes en alimentos

por mencionar algunos de los casos

dentro de esta instrumentación

los componentes que van eligiendo y que

van saliendo de la columna al pasar por

el detector lo que se ve héctor hace es

registrar una señal y esta señal al

final la a la va a interpretar por medio

de picos entonces cada pico nos va a

representar un compuesto estos picos en

donde los vamos a observar en el

programa programa que viene siendo el

gráfico que nosotros obtenemos de un

promotor

en estas figuritas que tenemos en esta

diapositiva podemos observar de forma

muy general lo que es un sistema

cromatográfico o los componentes que

lleva un sistema cromatográfico entre

ellos destacan lo que es el disolvente

que viene siendo el disolvente la fase

móvil ya lo hemos visto que después

algunos algunos este diagramas digamos

de de estos cromatógrafos nos dicen que

tiene un

des gasificado ok veremos por qué es

importante descalificar la fase móvil

pero de formas generales para que no se

dañen tanto la bomba como la columna

posteriormente ese desgasificar ahí si

viene o existe unas bombas las cuales

cuál es la función bueno precisamente

inyectar con cierta presión la fase

móvil dentro de la columna y después de

esta bomba

tenemos el inyector de la muestra que

está dado en esta parte acá en este otro

diagrama acá lo tenemos

también veremos qué tipos de inyecciones

hay inclusive hay algunos auto más

creadores que también veremos algunos

vídeos en sesiones posteriores y

posteriormente a esta inyección de

muestra que ocurre la parte medular de

la cromatografía que viene siendo la

columna

diversos tipos de columna vamos a tener

nosotros de acuerdo a lo que queramos

separar al igual como les mencioné que

no exista un detector universal en

cromatografía hamburgo exista una

columna universal tiene que ser

específica a las necesidades que

nosotros tengamos

posteriormente

vamos a atender de forma muy general un

detector

el cual va a estar recibiendo y

transformando la información de los

compuestos que sabemos en estos

compuestos van a interpretarse por medio

de un cromatógrafo que vienen siendo un

gráfico con picos de diversas alturas de

acuerdo a las concentraciones y a la

naturaleza de los componentes que

nosotros estemos separando de nuestra

muestra

ahora bien

en cromatografía líquida se conoce

dos modos de cromatografía en dos fases

y una conocida como fase normal y otra

con fase reversa sí a que hace

referencia a esto bien a la polaridad

que utilizamos tanto de la fase móvil

como de la fase estacionaria

observamos aquí en la diapositiva que en

el modo normal o en la fase normal

la partición de líquido líquido la fase

estacionaria es de naturaleza polar ok y

se utiliza una fase móvil de naturaleza

no polar existiendo muchísimos ejemplos

no uno de ellos bueno el hexano podemos

utilizar el té de petróleo o cualquier

éste

cualquier hidrocarburo que generalmente

se consideran no polares

esto favorece la retención de compuestos

polares

y la ilusión de compuestos no polares

a esto se le denomina fase normal si

esta parte de favorecer la retención de

compuestos polares y que luchan los

compuestos no polares pareciera de

momento y medio confuso pero es muy

sencillo de entender vamos a ver en

diapositivas más a ver la impresión a

pequeña animación a qué se refiere esto

y por qué es que se quedan retenidos los

compuestos polares en una fase normal

mientras que en la fase reversa es todo

lo contrario es decir en una fase

reversa la fase estacionaria de la

cromatografía es de naturaleza no polar

y la fase móvil es de naturaleza polar

sin pudiéndose utilizar alcohol es agua

mezclas de ellos etcétera etcétera el

punto es que va a tener una naturaleza

polar la fase móvil y esto va a provocar

que los compuestos no polares sean

retenidos mientras que los compuestos

polares

sean fluidos o sean arrastrados por la

fase móvil y esta es la denominada fase

reversa en cromatografía y que de forma

mi experiencia es la que más se utiliza

en cromatografía la fase de reversión

observamos también los en las dos

figuras de abajo de la presentación dos

ejemplos claros de un cromatógrafo que

componentes identificamos nosotros en un

cromatógrafo bien existe un tiempo en

este caso minutos

normalmente se expresa en minutos ampay

algunas columnas y una técnica que se

llama h plc en la cual son prácticamente

segundos en los que se separan los

componentes o menos de cinco minutos

tenemos toda la separación pero también

tenemos separaciones de forma general

estar dadas que pueden oscilar una hora

de análisis sobre separación entonces

tenemos el tiempo como uno de los

componentes de un croma programa también

tenemos dependiendo del detector

una absorban cya en este caso observamos

que la respuesta viene siendo una

corriente

esa corriente que la genera en un

detector específico que está absorban

cya es muy posiblemente un detector

conocido como arreglo de diodos o

detector ultravioleta en el cual me dice

que a 280 nanómetros

yo tengo diferentes absorban cias

ocasionada por cada uno de estos picos o

estas señales que no perdamos de vista

que químicamente son compuestos que se

están separando dentro de la columna y

que

el detector los está registrando

estos detectores los veremos a detalle

existen detectores de índice de

refracción también de pulsos am pero

méxico ultravioleta arreglos de diodos

dependiendo las naturales aquí en el día

en el cromato grama del lado derecho

observamos que la separación se está

efectuando para diversos azúcares y no

si todo el distrito

manny todo el sorbitol si hasta la

sacarosa en la cual fluye a los cercanos

a los 34 minutos

es decir a cada sacarosa tenemos que se

está obteniendo la parte central del

pico y ese sería su tiempo de migración

bien entonces en específico ya sabemos

que existen dos fases la fase normal y

la fase de reversa siendo la fase

reversa de las que más son utilizadas en

la cromatografía de forma resumida la

fase estacionaria es a polar y la fase

móvil es polar y esa es la

característica principal de una

cromatografía en fase reversa no se les

olviden los compuestos más retenidos son

los más polares ok por qué porque granos

es que son los que se retienen durante

mayor tiempo bueno yo creo que todos en

algún momento han escuchado

que lo polar dice el globo polar y lo no

polar disuelve lo no polar si ese es el

origen de la de por qué se quedan más

tiempo en la columna en el paso de la

fase reversa

los compuestos a polares porque porque

estamos haciendo pasar sobre la columna

una fase móvil polar y entonces no va a

tener digamos le hacía afinidad estos

compuestos a polares con esta fase de

móvil polar por ponerles un ejemplo

burdo pero para que lo entiendan es como

si tuviéramos aceite que tiene un aceite

vegetal que está hecho de diversos

ácidos

orgánicos son de naturaleza no polares

oa polares también llamados y si

utilizamos de fase móvil algo polar como

por ejemplo el agua vuelve a no ustedes

creen que esa fase móvil va a arrastrar

a los palos este aceite es que tengamos

dentro de la columna no esa fase móvil

de naturaleza polar precisamente va a

arrastrar a a luiz en primer lugar los

compuestos de naturaleza polar es decir

los que sean afines a ella mientras que

ya una vez que leyeron todos los

compuestos polares

nosotros podemos cambiar el gradiente de

la fase móvil y arrastrar a horas y

entonces los compuestos no polares

aquí nos menciona que la selectividad se

controlan fundamentalmente con la

composición de la fase móvil especial en

una la práctica no crean ustedes que si

no tenemos una separación de tres

compuestos vamos a empezar a cambiar la

columna no sólo pase usted lo que se

empieza a cambiar va a modificar es la

fase móvil es decir se puede implementar

polaridades o disminuir la polaridad de

la fase móvil algunos autores le

denominan a esto hacer series él u otro

picas es decir para ver para probar las

diferentes polaridades y cómo influyen

cada uno de estos componentes

[Música]

para obtener una fase móvil de fuerza de

ilusión óptima si se ensayan mezclas de

comúnmente en etanol a 2000 o pedro

forana en agua etcétera etcétera et el

punto es jugar con esas polaridades que

tienen la fase móvil para favorecer

nosotros la separación de los

componentes ahora

fase estacionaria estamos diciendo que

es una es la naturaleza no polar una

fase estacionaria muy común que se le

conoce en el análisis instrumental en la

cromatografía evidentemente es la

denominada c18 ok

esta cromatografía o esta fase

estacionaria perdón se 18 hace

referencia a que en nuestra fase

estacionaria

tiene unidos por medio de modificaciones

químicas o tratamientos químicos que se

le hizo tiene unidos grupos químicos de

18 átomos de carbono y entonces al tener

nosotros 18 átomos de carbono que es lo

que estamos generando que la fase

estacionaria tenga una naturaleza no

polar es como si tuviéramos

hidrocarburos

en la superficie de esa fase

estacionaria ok y aquí tenemos dos

compuestos de ejemplos el benzopireno y

el sulfato de estilo de estos dos

compuestos el sulfato de tilo

es el que tiene una naturaleza o es más

polar digámoslo así simplemente en

comparación con el benzopireno entonces

en una cromatografía en fase reversa el

sulfato de tilo valdría primero de la

columna es decir nosotros lo

detectaríamos primero en el cromato

grama sería el primer tipo que

obtuviéramos en comparación con el

benzopireno que es

- polar y que estaría un mayor tiempo

retenido dentro de la columna y que

entonces en un croma programa sería el

segundo pico que obtuviéramos en

tardaría más tiempo en el wef este

benzopireno y todo gracias a la

selectividad que existe entre la fase

estacionaria la fase móvil y los

componentes que nos interesan se parte

bien por el otro lado en la

cromatografía en fase normal que a

diferencia de la fase de reversa la fase

estacionaria es de naturaleza polar y la

fase móvil de naturaleza a polar 1 polar

las fases estacionarias se obtienen

haciendo reaccionar químicamente es

decir por tratamientos químicos los

centros y la no des activos de la sílice

con diversos tratamientos en uno de los

compuestos que principalmente hacen

reaccionar con la sílice es el trial

kill clorofila no lo cual genera una

fase estacionaria de naturaleza polar

la retención también como la falsa

reversa tiene lugar en esa especie de

capa líquida que va a estar

y depositada químicamente como

consecuencia de la distinta sólo me

libra relativa de la fase estacionaria

que en este caso en la fase normal te

damos que es de naturaleza polar y de la

fase móvil que es a polar donde él

analizó menos polar será el primero que

se luche y el más polar va a ser el

último en el oír es decir va a ser el

último en salir de la columna y si

estamos hablando de un la parte

instrumental es decir de que estamos

utilizando un cromatógrafo web en

nuestro producto grama bien

él analizó menos polar lo estaríamos

obteniendo en los primeros minutos en

mientras que el más polar va a ser el

pico con un tiempo de erupción más alto

bien para finalizar me gusta incluir les

alguna pequeña animación en esta en esta

ocasión

darle créditos al canal de youtube

mister simple science el cual tiene un

pequeño vídeo totalmente didáctico no no

no creen que es así de fácil

de lo que ocurre en la realidad pero

pues nos sirve para poder hacer un

resumen de lo que nosotros estamos

viendo en este tema directo marco del

sil

entonces vamos a

observar

este vídeo no tiene no tiene sonido no a

los otros entonces bueno en la fase aquí

nos hace la animación de lo que ocurre

en una fase normal en el cual la fase

móvil es de naturaleza no polar mientras

que la fase estacionaria aquí esté

coloreada de color azul nos viene siendo

polar

menciona que la columna está llena con

partículas de sílice

la síndica utiliza como tales de nada

la cíclica como tales de naturaleza

polar

y entonces existe una interacción entre

los compuestos polares de nuestra

muestra con esa fase estacionaria

permitiendo que el huyan primero

aquellos no polares

mientras que en la fase reversa ya

ocurre lo contrario es decir la fase

móvil es polar la fase estacionaria va a

ser de naturaleza no polar también

denominada hidrofóbica

y en este caso tenemos que la basílica

ha sido modificada con estas moléculas

que yo les decía denominadas c18 bueno

la más común y seriación no puede ir

desde ese 8 hace referencia al número de

carbonos que tiene ésta

esta fase estacionaria y eso lo

convierte en una fase estacionaria de

naturaleza no polar por lo tanto los

compuestos no polares van a

interaccionar a interaccionar más fuerte

con la fase estacionaria y esto que va a

provocar que sean los últimos en eludir

bien bueno pues hasta acá está esta

presentación espero que les haya quedado

claro si lo el fundamento de la

instrumentación que veremos a ver

también en posteriores sesiones cada uno

de los componentes del cromatógrafo y

ejemplos aplicativos de la cromatografía

tienen alguna duda no dejen no olviden

empezarlo aquí en los comentarios o a mi

correo