CROMATOGRAFÍA HPLC

Summary

El video explica detalladamente la cromatografía HPLC (High Performance Liquid Chromatography), una técnica de separación de compuestos mediante la interacción de una fase móvil líquida y una fase estacionaria en una columna. A diferencia de la cromatografía de gases, no está limitada por la volatilidad o estabilidad térmica de las muestras, permitiendo separar macromoléculas y especies iónicas. Se describen los componentes principales del equipo HPLC, incluyendo la columna C18, el inyector, la bomba y los detectores. También se mencionan aplicaciones en bioquímica, industria alimentaria y química forense, resaltando su importancia en el análisis de diversas muestras complejas.

Takeaways

• 📊 La cromatografía HPLC (High Performance Liquid Chromatography) es un tipo de cromatografía en columna que utiliza una bomba para hacer pasar una mezcla de analitos a través de una fase móvil y una fase estacionaria.
• 🧪 La fase móvil es un líquido que fluye a través de una columna que contiene la fase estacionaria, permitiendo la separación de compuestos en función de su afinidad con ambas fases.
• 🚫 A diferencia de la cromatografía de gases, la HPLC no está limitada por la volatilidad o estabilidad térmica de las muestras, lo que la hace adecuada para analizar macromoléculas y especies iónicas.
• 🧬 La HPLC es útil para separar productos naturales, materiales poliméricos y grupos funcionales de alto peso molecular.
• 🛠️ El equipo HPLC incluye un inyector para la muestra, una columna cromatográfica (la más común es la C18), un detector (que puede ser UV, IR o espectrometría de masas), y un software para visualizar los resultados en un cromatograma.
• 🧱 Las columnas cromatográficas se nombran por la estructura de hidrocarburos unida a la sílica, siendo la C18 la más utilizada debido a su cadena de 18 carbonos.
• 🔬 Los detectores en HPLC convierten las separaciones en señales que luego son interpretadas por el software, permitiendo cuantificar y analizar los analitos.
• 💧 La fase móvil en HPLC debe tener un grado de pureza elevado, llamado 'grado HPLC', para evitar la obstrucción del equipo.
• 🚰 La bomba en el HPLC es clave para proporcionar el flujo y presión adecuados, manteniendo un sistema constante para la separación efectiva de los analitos.
• 🏭 La cromatografía HPLC tiene aplicaciones en diversas áreas, como la caracterización de antibióticos, esteroides, proteínas, carbohidratos, contaminantes, y drogas en medicina forense.

Q & A

¿Qué significa HPLC y en qué consiste esta técnica?

HPLC significa 'High Performance Liquid Chromatography' o Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia. Es una técnica en la que una mezcla de compuestos se separa al pasar a través de una columna cromatográfica con la ayuda de una fase móvil líquida, bajo la acción de una bomba.

¿Cuál es la principal diferencia entre la cromatografía de gases y la cromatografía HPLC?

La principal diferencia es que la cromatografía de gases requiere que las muestras sean volátiles y térmicamente estables, mientras que la cromatografía HPLC no tiene esta limitación, lo que permite analizar macromoléculas y especies iónicas.

¿Qué papel desempeña la fase móvil en la cromatografía HPLC?

La fase móvil en HPLC es un líquido que fluye a través de la columna cromatográfica y facilita la separación de los compuestos en función de su afinidad con la fase estacionaria o la fase móvil.

¿Por qué es importante la elección de la columna cromatográfica en HPLC?

La elección de la columna cromatográfica es crucial porque afecta directamente la separación de los analitos. La columna más común es la C18, que contiene una estructura de 18 carbonos unida a una sílica, lo que influye en las características de la separación.

¿Qué son las fases estacionaria y móvil en la cromatografía HPLC?

La fase estacionaria es la columna que contiene un material, como la sílica, y la fase móvil es un líquido que fluye a través de esta columna. La separación ocurre en función de las interacciones de los compuestos con estas dos fases.

¿Qué tipos de detectores se utilizan en HPLC y cuál es su función?

En HPLC se pueden utilizar detectores ultravioleta, infrarrojo o de espectrometría de masas. Su función es detectar la separación de los compuestos tras su paso por la columna y generar una señal que se puede visualizar en forma de un cromatograma.

¿Qué grado de pureza deben tener los solventes utilizados en HPLC?

Los solventes deben tener un grado de pureza elevado, conocido como grado HPLC, para evitar la presencia de partículas o agentes externos que puedan interferir en el proceso, como obstruir la columna o el inyector del equipo.

¿Qué aplicación tiene la cromatografía HPLC en la industria química?

En la industria química, HPLC se utiliza para caracterizar compuestos como aromáticos, tensoactivos, colorantes, así como para detectar contaminantes como fenoles, pesticidas y herbicidas.

¿Qué ventajas ofrece la HPLC respecto a otras técnicas cromatográficas?

HPLC permite la separación de compuestos no volátiles y con alta estabilidad térmica, como macromoléculas y especies iónicas. Además, ofrece una alta selectividad debido a la posibilidad de intercambiar fases estacionarias.

¿Cómo contribuye la bomba en el funcionamiento del equipo HPLC?

La bomba es esencial en HPLC ya que controla el flujo de la fase móvil a través del sistema, asegurando que la muestra fluya correctamente bajo una presión constante, lo que es fundamental para un análisis eficiente.