Agarose Gel Electrophoresis - Animated Video

Summary

La electroforesis en gel de agarosa es una técnica utilizada para separar fragmentos de ADN u otras macromoléculas como ARN y proteínas según su tamaño y carga. Se prepara el gel con polvo de agarosa y se calienta hasta disolverse. Se enfríe y se añade etidio bromuro, un agente intercalante tóxico que fluoresce bajo luz ultravioleta, permitiendo visualizar las bandas de ADN. Se carga el gel con muestras y se somete a corriente eléctrica, separando los fragmentos según su tamaño. Finalmente, la gel se expone a luz UV para observar las bandas de ADN, comparándolas con una escala de referencia para determinar sus longitudes.

Takeaways

• 🧪 El electroforesis en gel de agarosa es una técnica para separar fragmentos de ADN u otras macromoléculas como ARN y proteínas según su tamaño y carga.
• 🌡 La preparación del gel es crucial, y el agarosa debe disolverse a una temperatura de aproximadamente 55 °C antes de verterlo en el tanque de electroforesis.
• 🔬 Los fragmentos de ADN más grandes se resuelven mejor en un gel de baja concentración, mientras que los más pequeños en uno de alta concentración.
• 🚫 El etidio bromuro, un agente intercalante, es altamente tóxico y debe manipularse con precaución en un armario de gases.
• 🌌 Al exponerse a la luz ultravioleta, el etidio bromuro hace que las bandas de ADN se iluminen, permitiendo su visualización.
• 🎚️ El electroforesis requiere un tanque con electrodos negativos y positivos, y un gel con ranuras para cargar las muestras.
• 🏺 El buffer TAE o TBE es esencial para proporcionar iones que lleven corriente y mantener un pH constante durante la electroforesis.
• 🧬 Se utiliza una solución de carga para agregar densidad a las muestras de ADN, facilitar su descenso en el gel y monitorizar su progreso.
• 📏 Se carga una referencia de tamaño molecular, conocida como escalera de ADN, para comparar y determinar los tamaños aproximados de las bandas de ADN.
• ⚡️ La aplicación de una corriente eléctrica hace que las moléculas de ADN, con carga negativa, se muevan hacia el polo positivo en el gel.
• 🌌 Las bandas de ADN resultantes en el gel son visibles bajo luz UV y representan fragmentos de ADN de tamaños similares que se han movido juntos.

Q & A

¿Qué técnica se utiliza para separar fragmentos de ADN u otras macromoléculas como ARN y proteínas según su tamaño y carga?

La técnica utilizada es la electroforesis en gel de agarosa.

¿Cuál es el primer paso en la separación de fragmentos de ADN?

El primer paso es la preparación del gel o la fabricación del gel.

¿Qué tipo de gel se utiliza para resolver mejor las moléculas más grandes en electroforesis de agarosa?

Para resolver mejor las moléculas más grandes se utiliza un gel de baja concentración.

¿Cómo se prepara la solución de agarosa antes de verterla en el tanque de electroforesis?

Se calienta la solución de agarosa en un microondas hasta que se disuelva completamente y luego se enfríe a aproximadamente 55 grados Celsius en un baño de agua.

¿Qué es el propósito de agregar etidio bromuro al gel de agarosa?

El etidio bromuro es un agente de intercalación que se intercala entre pares de bases de la molécula de ADN, permitiendo que las bandas de ADN se vean al exponerlas a luz ultravioleta.

¿Por qué es necesario manejar con cuidado el etidio bromuro durante la electroforesis de agarosa?

El etidio bromuro es altamente tóxico y mutagénico, por lo que debe manipularse con precaución, generalmente en un hood de gas.

¿Qué es un 'tanque de electroforesis' y cómo se prepara para la fabricación del gel?

Un tanque de electroforesis es un contenedor con electrodos negativos y positivos donde se prepara el gel. Se coloca una malla para crear surcos para cargar muestras y se fijan barreras de moldeo para evitar que la solución de agarosa se derrame durante el enfriamiento.

¿Qué es un 'marcador de tamaño molecular' y cómo se utiliza en la electroforesis de agarosa?

Un marcador de tamaño molecular, también conocido como escalera de ADN, es una referencia estándar que contiene fragmentos de ADN de longitudes conocidas. Se carga en el primer surco del gel de agarosa para comparar y determinar los tamaños aproximados de las muestras de ADN.

¿Qué es la carga de los fragmentos de ADN y cómo afecta su movimiento a través del gel durante la electroforesis?

Los fragmentos de ADN tienen una carga negativa debido a los grupos fosfato en su esqueleto de azúcar-fosfato. Por lo tanto, cuando se colocan en un campo eléctrico, los fragmentos de ADN se mueven hacia el polo positivo.

¿Cómo se pueden ver las bandas de ADN después de la separación en la electroforesis de agarosa?

Después de la separación, el gel se coloca bajo luz ultravioleta, lo que permite ver las bandas de fragmentos de ADN, cada una conteniendo una gran cantidad de fragmentos de ADN del mismo tamaño que han viajado juntos a la misma posición.