Prácticas de Microbiología. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias. Vídeo 8

Summary

El transcripto describe un método para identificar bacterias Gram-negativas utilizando pruebas bioquímicas en micro tubos. Se explica el proceso de inoculación y la incubación a 37 grados durante 24 horas. Las pruebas incluyen la detección de enzimas y la utilización de diferentes sustratos, como citrato y azúcares, para diferenciar a las bacterias. Los resultados se interpretan mediante cambios de color y se relacionan con un código numérico para identificar la especie bacteriana, proporcionando información sobre su identificación y características bioquímicas.

Takeaways

• 🔬 Las pruebas bioquímicas son utilizadas para identificar bacterias gram-negativas.
• 🧫 Se emplean micro tubos en una galería App y 20, diseñados específicamente para la identificación de enterobacterias y bacterias relacionadas.
• 💧 Antes de la inoculación, se añade agua a los alveolos de la base de la galería y se retira el exceso de agua.
• 🌡 Se inicia la identificación a partir de un cultivo en curva y se prepara una suspensión bacteriana en solución salina para inocular en los tubos.
• 🚫 En los tubos VP help y FIT, la suspensión bacteriana también se añade a la cúpula.
• 🔴 En tubos como H2S y Ure, se rellena la cúpula con parafina líquida para crear condiciones anóxicas.
• 🌡 Las pruebas bioquímicas se realizan a 37 grados centígrados durante 24 horas para observar los resultados.
• 🟡 La presencia de β-galactosidasa y β-glucuronidasa se determina mediante la observación del cambio de color del medio a amarillo.
• 🟢 La utilización de citrato como única fuente de carbono se evalúa, y una subida de pH indica una reacción positiva, con el indicador de pH cambiando a azul.
• ⚫️ La producción de gas硫化氢(H2S) se evidencia por la aparición de un precipitado negro en el medio.
• 🍬 La utilización de azúcares se identifica a través de la acidificación del medio, lo que provoca un cambio de color del indicador de pH a amarillo.

Q & A

¿Para qué se realizan las pruebas bioquímicas en micro tubos?

Las pruebas bioquímicas en micro tubos se realizan para la identificación de bacterias gram-negativas, principalmente enterobacterias y bacterias relacionadas.

¿Cuál es la función de la galería App y20 utilizada en la identificación de bacterias?

La galería App y20 está diseñada para la identificación de enterobacterias y bacterias relacionadas, y consiste en 20 micro tubos con medio deshidratado para realizar pruebas bioquímicas específicas.

¿Cómo se prepara la suspensión bacteriana antes de inocular los tubos?

Se parte de un cultivo de bacterias, de donde se seleccionan algunas colonias para crear una suspensión en solución salina, que luego se inoculará en cada tubo.

¿Qué se debe hacer antes de la inoculación en los tubos VP help y fit?

Antes de la inoculación en los tubos VP help y fit, se debe añadir agua a los alveolos de la base de la galería y retirar el exceso de agua.

¿Cuál es el propósito de rellenar la cúpula con parafina líquida en ciertos tubos?

Rellenar la cúpula con parafina líquida en tubos como H2S y Ure se hace para crear condiciones anóxicas dentro del tubo, lo que es necesario para ciertas pruebas bioquímicas.

¿Cómo se interpretan los resultados de la prueba beta-galactosidasa (BGAL)?

En la prueba beta-galactosidasa, un color amarillo indica una reacción positiva, lo que sugiere que la bacteria produce la enzima, mientras que una reacción negativa se manifiesta como incoloro.

¿Qué indica un color rojo en la prueba de hidrolisis de urea (Urease)?

Un color rojo en la prueba de hidrolisis de urea indica una reacción positiva, lo que significa que la bacteria posee las enzimas necesarias para degradar la urea.

¿Cómo se determina si una bacteria puede utilizar citrato como única fuente de carbono?

Se investiga mediante la prueba de utilización de citrato, donde una subida de pH que hace que el indicador azul de bromo timol se vuelva color azul indica una reacción negativa, mientras que una utilización positiva se manifiesta por un color verde pálido o amarillo.

¿Qué sucede si una bacteria realiza respiración anaerobia en la prueba de H2S?

Si una bacteria realiza respiración anaerobia y utiliza sulfato sódico como aceptor final de electrones, se generará un precipitado negro, lo que indica una reacción negativa.

¿Cómo se interpreta el resultado de la prueba de gelatinización (Gel)?

En la prueba de gelatinización, si la bacteria degrada la gelatina, se libera un pigmento negro que se difunde por el medio, lo que indica una reacción positiva. En caso contrario, si no se difunde, la reacción es negativa.

¿Qué pasos se siguen para leer las pruebas que requieren revelado después de la incubación?

Para las pruebas que requieren revelado, como la cda y la nd, se añaden ciertos reactivos a la galería después de incubarla, y se observan los cambios de color para interpretar los resultados.

¿Cómo se determina si una bacteria tiene la capacidad de reducir nitrato a nitrito o a nitrógeno molecular?

Se realiza la prueba de reducción de nitratos, donde se añade ácido sulfúrico y alfa naftilamina al tubo. Si aparece un color rojo, la bacteria tiene nitrato reductasa. Si se añade polvo de zinc y el tubo se mantiene amarillo, indica la presencia de nitrógeno molecular, lo que sugiere que la bacteria tiene ambas enzimas, nitrato y nitrito reductasa.

¿Qué hace la prueba de oxidasa (Ox) para determinar si una bacteria tiene citocromo oxidasa?

En la prueba de oxidasa, se añade una gota de tetra metil parafenilendiamina sobre una colonia crecida. Si da un color púrpura antes de 20 minutos, la reacción es positiva, lo que indica la presencia de citocromo oxidasa en la bacteria.

¿Cómo se interpreta el resultado final de las pruebas bioquímicas para la identificación de la bacteria?

Se rellena el papel del API 20 con las pruebas bioquímicas realizadas, y se calcula un número de siete dígitos basado en los resultados positivos de las pruebas. Este número se utiliza para buscar en un libro de claves y determinar a qué especie bacteriana pertenece la bacteria en cuestión.