Pembahasan Laboratory Case B3 : Spektrofotometer

Summary

In this educational video, the presenter from the Biochemistry Department at Hasanuddin University discusses the application of spectrophotometry and enzymology in clinical chemistry. The video focuses on a case study of a 64-year-old male with type 2 diabetes, undergoing regular health check-ups and using SGLT inhibitors. The discussion revolves around the qualitative Benedict test for urine glucose concentration, its limitations, and how it can be converted into a quantitative method using spectrophotometry. The video also highlights the importance of accurate glucose measurement in clinical diagnosis and the superiority of quantitative analysis for diagnostic reliability.

Takeaways

• 😀 The video is an educational discussion by a staff member from the Biochemistry Department of Hasanuddin University's Faculty of Medicine.
• 🏥 The case study involves a 64-year-old male patient with a 12-year history of type 2 diabetes, who is on regular check-ups and medication.
• 💊 The patient is taking an SGLT2 inhibitor, a type of anti-diabetic medication that increases glucose excretion in urine, leading to high urinary glucose levels.
• 🔍 Routine urine tests are conducted using Benedict's reagent to monitor treatment effectiveness, which is qualitative and challenges doctors with color interpretation.
• 🌈 The difficulty in distinguishing between green, yellow-green, or orange hues in urine samples poses a problem for accurate glucose concentration estimation.
• 🧪 The video discusses various methods for measuring blood glucose levels, including qualitative, semi-quantitative, and quantitative approaches.
• 🔬 The qualitative Benedict's test can be converted into a quantitative method using spectrophotometry, which measures the absorbance of the color change caused by the reaction.
• 📈 The principle of spectrophotometry is based on the measurement of light absorbance, which correlates to the concentration of the substance in the sample.
• 📝 The video references a research paper that validates the quantification of Benedict's test results using spectrophotometry, improving diagnostic value.
• 📚 The educational content is aimed at laboratory technicians, emphasizing the importance of understanding the validated methods for quantifying glucose concentration.

Q & A

What is the main topic discussed in the video?

The main topic discussed in the video is the qualitative and quantitative analysis of glucose levels in urine samples, particularly focusing on the use of Benedict's test and its modification for quantitative analysis using spectrophotometry.

Why is it challenging to differentiate between certain colors in Benedict's test?

Differentiating between colors in Benedict's test can be challenging because the colors that form, such as greenish-yellow, yellowish-green, or light orange, are very similar and can be subjective to the human eye, making it difficult to accurately estimate glucose concentrations.

What is the significance of quantitative analysis in medical diagnosis?

Quantitative analysis provides a numerical value for the concentration of a substance, which is more reliable and accurate than qualitative analysis. This high level of accuracy is crucial for medical diagnosis as it allows for precise measurement and assessment of health conditions.

How does the principle of spectrophotometry relate to the color change in Benedict's test?

The principle of spectrophotometry is based on the measurement of light absorption by a colored solution. In Benedict's test, the color change that occurs due to the presence of reducing sugars can be quantified by measuring the absorbance of the solution at a specific wavelength using a spectrophotometer.

What is the role of CO2 in the modified Benedict's test for glucose quantification?

In the modified Benedict's test, the actual substance measured for glucose concentration is CO2, not glucose directly. The presence of reducing sugars in the sample leads to the production of copper(II) oxide (Cu2O), which is then detected by the spectrophotometer, indicating the concentration of glucose.

What is the purpose of a blank in spectrophotometry?

The purpose of a blank in spectrophotometry is to account for any background absorbance that may be present due to the reagents used. It helps to eliminate the influence of these reagents on the measurement, ensuring that the absorbance readings are specific to the sample being tested.

Why is it important to measure absorbance at the maximum wavelength (λmax) in spectrophotometry?

Measuring absorbance at λmax is important because it is the wavelength at which the compound absorbs light most strongly. This ensures the most accurate and sensitive measurement of the compound's concentration in the sample.

What is the significance of a linear relationship between concentration and absorbance in spectrophotometry?

A linear relationship between concentration and absorbance indicates that the method is reliable and that the absorbance readings can be directly proportional to the concentration of the analyte in the sample, allowing for accurate quantification.

What steps are involved in preparing samples and blanks for spectrophotometry analysis as described in the video?

The steps include preparing the sample and blank solutions, ensuring the correct height of the liquid in cuvettes (3/4 full), and performing blanking in the spectrophotometer to account for any background absorbance before measuring the absorbance of the samples.

How does the video script describe the process of modifying Benedict's test for quantitative analysis?

The video script describes the process of modifying Benedict's test by heating the sample to induce color change, followed by centrifugation to separate the precipitate from the supernatant. The supernatant is then used for spectrophotometric analysis, where the absorbance readings are taken at the maximum wavelength to quantify the glucose concentration.

Outlines

00:00

🧪 Biochemistry Department Introduction and Case Discussion

The speaker introduces themselves as a staff member from the Biochemistry Department at Hasanuddin University's Faculty of Medicine. They announce that the video will discuss two sub-topics related to spectrophotometry and enzymology. The first case study involves a 64-year-old male with a 12-year history of type 2 diabetes. The patient has been using SGLT2 inhibitors, which increase glucose excretion in urine, leading to high urinary glucose levels. The doctor conducts a routine urine test using Benedict's reagent to check for glucose concentration, resulting in a red color indicating high glucose levels. The discussion then explores the challenges of distinguishing colors in urine tests, which can be difficult in real life despite being clear in images. The importance of quantitative analysis over qualitative methods is emphasized, and various methods for measuring glucose levels in body fluids are mentioned, including blood and urine tests.

05:00

🌡 Understanding Qualitative and Quantitative Methods in Glucose Measurement

The speaker explains the difference between qualitative, semi-quantitative, and quantitative methods of glucose measurement. Qualitative methods provide a yes-or-no answer, semi-quantitative methods give a rough estimate, and quantitative methods offer precise measurements. The video discusses the possibility of converting the Benedict's test, which is qualitative, into a quantitative method using spectrophotometry. The principle behind this conversion is based on the color change in the urine sample, which can be measured for absorbance using a spectrophotometer. The speaker also addresses the subjective nature of qualitative tests and the higher diagnostic value of quantitative tests, explaining the working principle of a spectrophotometer and how it detects absorbance to measure glucose levels.

10:01

🔬 Research-Based Modifications of Benedict's Test for Glucose Quantification

The speaker references a research paper published in 2020 that attempts to quantify the results of Benedict's test using a spectrophotometer. The paper details a method that involves heating the sample with Benedict's reagent, followed by centrifugation to separate precipitates from the supernatant. The supernatant is then used for spectrophotometric analysis, which measures the absorbance that correlates with glucose concentration. The discussion highlights the specificity of the method, as it indirectly measures glucose through the detection of copper(II) oxide formed during the reaction.

15:05

📖 Detailed Procedure for Measuring Glucose Concentration Using Spectrophotometry

This section outlines the step-by-step procedure for measuring glucose concentration using the modified Benedict's test and spectrophotometry. It emphasizes the preparation of the sample and the blank, the importance of excluding interfering substances, and the correct filling of cuvettes to ensure accurate measurements. The process includes blanking the spectrophotometer with the blank solution, measuring the sample's absorbance, and determining the absorbance peak to find the maximum wavelength for accurate glucose concentration measurement.

20:06

📊 Absorbance Measurement and Wavelength Determination in Glucose Analysis

The speaker explains the importance of determining the maximum absorbance wavelength for accurate glucose concentration measurement. After blanking, the sample's absorbance is measured at the maximum wavelength, which is found to be 740 nanometers in the given example. The discussion includes the linear relationship between the concentration of copper(II) oxide and absorbance, indicating a direct correlation between glucose concentration and absorbance according to Beer's Law. The speaker also addresses how to handle multiple absorbance peaks and the need to measure absorbance at different wavelengths for a comprehensive analysis.

25:07

🔍 Observations and Calculations of Absorbance for Glucose Measurement

This part discusses the observations of absorbance at two maximum wavelengths and the calculations involved in determining glucose concentration. The speaker instructs on measuring absorbance twice at different wavelengths and emphasizes the need for accurate measurements to ensure reliable glucose concentration results. The summary concludes with a transition to the second case discussion, which involves enzymology.

Keywords

💡Sodium-glucose Transporter 2 (SGLT2) inhibitors

SGLT2 inhibitors are a class of anti-diabetic medications that work by inhibiting the reabsorption of glucose in the kidneys, leading to increased glucose excretion in urine. This helps lower blood glucose levels. In the video, the patient with a 12-year history of type 2 diabetes is taking SGLT2 inhibitors, which is why his urine glucose concentration is high, as measured by the Benedict's test.

💡Benedict's test

Benedict's test is a qualitative chemical test used to detect the presence of reducing sugars. It involves heating a sample with Benedict's reagent, which changes color if reducing sugars are present. In the video, the test is used to monitor the effectiveness of the patient's diabetes treatment by assessing urine glucose concentration, resulting in a brick-red precipitate indicating high glucose levels.

💡Qualitative analysis

Qualitative analysis is a scientific method that determines the presence or absence of certain substances but does not quantify them. In the context of the video, the Benedict's test provides a qualitative result, indicating whether glucose is present in the urine but not providing a precise concentration.

💡Quantitative analysis

Quantitative analysis, in contrast to qualitative, provides a numerical value for the concentration of a substance. The video discusses the conversion of the qualitative Benedict's test into a quantitative method using spectrophotometry to accurately measure glucose concentration, which is more reliable for medical diagnosis.

💡Spectrophotometry

Spectrophotometry is an analytical technique used to measure the absorption of light by a substance, which is directly proportional to its concentration. In the video, the method is used to quantify the results of the Benedict's test by measuring the absorbance of the colored product formed in the presence of glucose, thus allowing for a quantitative analysis.

💡Enzymology

Enzymology is the study of enzymes, including their structure, function, and mechanisms. The video touches on the basics of enzymology in relation to the measurement of glucose, which is an enzyme-catalyzed process. Understanding enzyme kinetics is crucial for accurately interpreting the results of glucose tests.

💡Colorimetric method

The colorimetric method is a type of chemical analysis that measures the color intensity of a solution, which correlates with the concentration of a particular analyte. The video mentions the colorimetric enzyme method for glucose measurement, which is a quantitative technique that provides a direct readout of glucose concentration.

💡Glucose oxidase strip test

Glucose oxidase strip tests are semi-quantitative methods used for glucose detection in urine. They involve a reaction that changes color in the presence of glucose, allowing for a rough estimate of glucose concentration. The video mentions this method as part of the discussion on various techniques for glucose measurement.

💡Linearity

Linearity in the context of the video refers to the direct proportionality between the concentration of a substance (like glucose) and its measurable effect (such as absorbance). A linear relationship is desirable in analytical methods as it allows for accurate and predictable results. The video discusses the importance of linearity in the calibration curve for spectrophotometric glucose measurement.

💡Calibration curve

A calibration curve is a graphical representation used in analytical chemistry to relate the measured response (like absorbance) to the concentration of an analyte. The video describes the creation of a calibration curve for the spectrophotometric measurement of glucose, which is essential for converting absorbance readings into actual glucose concentrations.

Highlights

Introduction to the discussion on spectrophotometry and enzymology basics.

Case study of a 64-year-old male with a 12-year history of type 2 diabetes.

Discussion on the use of SGLT2 inhibitors for diabetes management.

Routine urine tests to monitor treatment success using Benedict's reagent.

Challenges in distinguishing colors in urine test results for accurate glucose concentration estimation.

Differentiating between qualitative and quantitative methods in clinical biochemistry.

The limitations of qualitative methods and the advantages of quantitative methods for glucose measurement.

Principle of spectrophotometry and its application in quantifying glucose levels.

Conversion of Benedict's qualitative test into a quantitative method using spectrophotometry.

Importance of understanding the substances measured in glucose concentration tests.

The non-specificity of Benedict's test due to the detection of copper(II) oxide instead of glucose directly.

Research by Peter in 2020 on the quantification of Benedict's test results using spectrophotometry.

Description of the experimental procedure for measuring glucose concentration using the modified Benedict's test.

Preparation of samples and blanks for accurate spectrophotometric analysis.

The role of blanking in spectrophotometry to exclude interfering substances.

Calibration of spectrophotometers and the importance of measuring absorbance at the maximum wavelength.

Linear relationship between the concentration of copper(II) oxide and absorbance in the spectrophotometric analysis.

Practical application of the modified Benedict's test for glucose quantification in clinical settings.

Transcripts

Halo

assalamualaikum warahmatullahi

wabarakatuh perkenalkan saya lagi lancar

Olla saya merupakan staf dari

asisten dari Departemen biokimia

Fakultas Kedokteran Universitas

Hasanuddin

pada video kali ini

kami akan membahas cash discussion

pembahasan trust us atau skenario yang

terkait dengan 2 sub bahasan kita yaitu

spektrofotometri dan dasar enzimologi

baik kita masuk ke kasus yang pertama

atau kasus B3 bahwa pada kasus ini eh

dinyatakan ada seorang pria usia 64

tahun dimana ke dia sudah memiliki

riwayat diabetes

melitus tipe 2 sejak 12 tahun yang pun

Kemudian datang ke pusat kesehatan

masyarakat untuk regular check-up

mengontrol kadar gula darahnya

setahun belakangan ini pasien ada

mengonsumsi obat-obatan anti diabetes

golongan

sglt to inhibitor atau biasa kepanjangan

ini adalah sodium glukos Transporter tuh

inhibitor yaitu obat-obatan antidiabetes

yang menghambat reabsorpsi atau

menghambat penyerapan ulang daripada

glukosa pada sel tubulus daripada ginjal

sehingga

pasien pasien diabetes yang mengonsumsi

obat ini itu cenderung memiliki kadar

glukosa urin yang tinggi Nah untuk

memonitor atau mengevaluasi kesuksesan

pengobatan maka dokter ini melakukan

pemeriksaan urin rutin

untuk melihat konsentrasi glukosa secara

kita Thief menggunakan reagen benedict

nah hasilnya bisa dilihat sendiri bahwa

hasilnya ini

terbentuk warna yang kita sebut sebagai

webred ya warnanya ini interpretasinya

ini adalah high atau mengandung kadar

glukosa yang tinggi dengan estimasi itu

sekitar lebih dari 2 G persen baik Nah

kita lanjutkan

eh permasalahan daripada skenario ini

ini sebenarnya adalah

pembahasan permasalahan yang umum

bahwasanya

Eh

kalau misalnya warna yang terbentuk sama

seperti skenario ini yaitu warna merah

bata publik rap maka tidak ada masalah

kita bisa

mengidentifikasi kita bisa

warnanya tetapi yang menjadi masalah

adalah jika yang muncul itu adalah warna

hijau kekuningan atau kuning kehijauan

ataupun warna orange orange yang agak

pudar seperti ini tiga warna ini yang

menjadi tantangan bagi seorang dokter

untuk membedakan nah

eh Kena warnanya hampir-hampir mirip

pada keadaan nyata kalau dalam gambar

ini memang sangat sangat jelas

perbedaannya tetapi dalam keadaannya

dalam dunia nyata diri Los

sangat sulit untuk kita membedakan warna

sehingga

angka-angka yang ada di bawah ini itu

cenderung

sangat sulit untuk kita

melakukan penentuan atau estimasi kadar

glukosa karena warnanya yang hampir

mirip disinilah fungsi kuantifikasi

berperan Ayo kita harus betul-betul

mengetahui berapa angkanya berapa

konsentrasi glukosa Berdasarkan

perubahan warna nah

dalam eh biokimia klinik kita itu

mengenal beberapa metode dalam mengukur

kadar glukosa darah pada cairan tubuh

manusia ke cairan tubuh manusia yang

dimaksud Disini yang paling sering itu

adalah darah dan urine kita bisa

menggunakan benitez unfortunately the

dicas ini dia sifatnya adalah kualitatif

Kemudian yang kedua ini kita menggunakan

glukosa oksidase striptest ini biasanya

ada di urinalisis Yes trik urinalisis

Danti kalian akan melakukan praktikum

urinalisis di sistem urinarius nah eh

ini merupakan metode yaitu semi

aku anti tapi kemudian

yang adalah yang terakhir ini

calorimetric enzymes C ini adalah metode

yang sudah kuanti

punya ini jadi perbedaan antara

kualitatif dan kuantitatif kalau

kualitatif itu kita cuma hasil akhirnya

hanya positif atau negatif kalau

semikuantitatif sama seperti ini ya Ada

tentangnya tidak jelas Angkanya berapa

yang jelas ada tentangnya 0,5 sampai 100

sampai 1,5 lebih dari dua yaitu semi

kuantitatif sedangkan kalau kuantitatif

itu yang dihasilkan adalah

angkanya ya real concentration nya yang

langsung kita

hasilkan disini jadi ini yang yang

paling bagus eh delay kepercayaannya

atau nilai diagnostiknya yang paling

tinggi itu adalah pemeriksaan secara

kuantitatif Nah untuk mengukur glukosa

itu kita mengenal calorimetric enzyme

say dan ini menggunakan

spektrofotometri Jadi pertanyaan pertama

Apakah bisa kuantifikasi glukosa ini

kita lakukan secara spectrophotometric

jawabannya ia bisa nah sekarang

permasalahannya

yang menjadi

pvoc us pembahasan kita pada skenario

ini adalah tes Benedict nya apakah bisa

ke sebelah Dik yang Which is Benedict

kesini is qualitative method kita

konversi dia menjadi quantitative method

nah bagaimana caranya Apakah bisa pakai

spektrofotometri jawabannya bisa nah

baik kita lanjut Nah

apakah bisa menggunakan sistem metode

spektrofotometri untuk melakukan

kuantifikasi hasil daripada reaksi B Hai

jawabannya bisa Kenapa karena Benedict

tes ya itu prinsip kerjanya berdasarkan

color change atau perubahan warna dan

tadi Wak yang tadinya warna urine itu

adalah kuning jernih misalnya kemudian

kita teteskan Benedict kita Panaskan

kemudian dia akan berubah kalau

konsentrasi gulanya tinggi Ya tentu dia

akan berubah menjadi warna merah bata

berarti deteksinya secara visual itu

adalah berdasarkan perubahan warna nah

ingat kembali setiap cairan yang

berwarna itu kita bisa mengukur

serapannya kita bisa mengukur absorbansi

nya Oke jadi kita bisa mengukur

absorbansi nya menggunakan apa tentu

menggunakan

spektrum foto nekat jadi jawabannya bisa

kita menggunakan spektrofotometer Nah

kemudian ada lagi satu statement yang

penting diketahui bahwasanya

kualitatif ensem iku kreatif meja

monastery subjektif

apa namanya pemeriksaan kualitatif

menghasilkan yes or no festival negatif

itu nilai diagnostiknya sangat rendah

Oke

semikuantitatif nilai diagnostiknya

sedikit lebih tinggi dari kualitatif

sedangkan pemeriksaan kuantitatif itu

yang memiliki nilai diagnostik yang

sangat tinggi nah Bagaimana prinsip

kerjanya sama seperti prinsip kerja yang

sudah kita bahas pada saat pada saat

diskusi praktikum mengenai prinsip kerja

spektrofotometer yaitu

detektor yang ada di sini ya ini output

Cried out hasilnya detektor yang ada di

sini itu mendeteksi Isra Pak lapo

mendeteksi

serapannya ya mendeteksi absorbansinya

Shakira kita the tidak usah Jelaskan

penyelewengan mengenai prinsip Nah

sekarang kita lanjut pertanyaan berikut

yang bahwasanya

substansi apa yang merepresentasikan

kadar glukosa ide perlu kita ingat

ketika kita menggunakan metode Benedict

kemudian kita mau modifikasi metode

Benedict itu

menjadi suatu metode yang kuantitatif

Artinya kita menggunakan

spektrofotometer sebenarnya yang diukur

oleh spektrofotometer perubahan warna

yang terjadi itu bukan oleh karena

glukosa tetapi oleh karena Ian koplo

oksida ini

cu2o nya ini jadi a substance i yang

merepresentasikan konsentrasi glukosa

sebenarnya itu adalah co2o jadi tidak

secara direct tidak secara langsung kita

menghitung kadar glukosa dengan metode

ini tetapi yang sebenarnya kita hitung

itu adalah kadar co2o Nah berarti tidak

spesifik dong Oh ya kalau kita bicara

spesifik atau tidak memang metode ini

kurang spesifik karena yang kita yang

kita deteksi atau yang kita hitung

konsentrasinya bukan glukosa secara

langsung tetapi kuku oksida nah tetap

ikut peroksida ini terbentuk oleh karena

adanya

gula pereduksi yang ada di dalam sampel

tersebut sehingga kalau ininya banyak

kalau konsentrasi gulanya banyak

automatic klik konsentrasiku peroxida

juga akan ikut meningkat inilah yang

akan kita deteksi sehingga peningkatan

co2o yang memberikan gambaran warna

merah ini Itu sebab ding dengan

konsentrasi daripada gula pereduksi yang

terkandung di dalam sampel tersebut ya

cek kita lanjut nah ini adalah pepper

yang dipublish yang dipublikasi tahun

lalu the tahun 2020

Peter ini berusaha melakukan

kuantifikasi

daripada hasil tes Benedict ia jadi

perusahaan yang konon kuantifikasi dan

dia menggunakan spektrofotometer Dan

hasilnya itu bisa kali David tervalidasi

Nah jadi kalau Mungkin ada yang ingin

membaca baca lengkap mengenai account

ification of fisheries besok kualitatif

teknik of Benedict you can read this

paper oke nah

pada Paper ini yang ada cover ini itu

dia tetap menggunakan Benedict ya tetapi

mungkin begitu The Bone Dik yang

dilakukan pada Paper ini itu lebih

research bis ya lebih research-based

bukan educational B seperti kita kita

inginkan

eh sangat sederhana ya kita masukkan

sampel masukkan reagen benedict kemudian

kita Panaskan dan kita lihat perubahan

warna yang terjadi Ipin septari simple

Om apa namanya secara simpel n batin

this paper

epitel upbit death

metal bahwasanya metode yang digunakan

itu agak sedikit kompleks dari metode

yang kita sudah praktikum kan ya tetapi

terlepas daripada itu yang jelasnya ini

adalah metode Benedict insip kerjanya

sama nah pada daerah yang berwarna biru

inilah Dia memodifikasi tes ini

bahwasanya ketika dia sudah

memanaskan ya

terbentuklah terbentuk perubahan warna

kemudian dilakukan sentrifugasi

Nah sentrifugasi Nah setelah

sentrifugasi akan terbentuk 2 Duo jadi

fungsinya untuk memisahkannya memisahkan

zat-zat yang bisa mengendap dan zat-zat

yang memiliki massa jenis yang rendah

zat-zat yang memiliki massa jenis yang

rendah itu dia akan menjadi supernatan

istilahnya jadi akan menjadi supernatan

dan dia akan menjadi cairan didalam

tabung tersebut Sedangkan yang mengendap

itu dia akan menjadi presipitat ya

pepper ini membuang spesifitasnya

discarded presipitat

MB Rusdi supernatan jadi dia menggunakan

supernatan nya dengan pengenceran 1

banding 50 atau banding 5 maksudnya

eh satu ML supernatan dicampur dengan 5

ml aquades gitu maksudnya pengenceran 1

banding 50 Ia menggunakan supernatan nya

kemudian supernatan inilah yang dia

deteksi secara spektrofotometri

Nah setelah spectrophotometric

mendeteksi karena

kena yang spectrophotometric deteksi

otomatis nilai hanya atau nilai

absorbansinya maka nilai absorbansi

inilah yang

merepresentasikan ya kadar

daripada

glukosa eh jadi ini destino saja tidak

usah didalami

gambar ini yang jelas kita tahu

bahwasanya sudah ada pepper sudah dari

10 caption yang

melakukan modifikasi Benedict

berdasarkan Teknik spectrophotometric

ini intinya Silet ini ya adik-adik tidak

usah terlalu panjang lebar memahami ini

karena masih banyak pembahasan yang

sangat penting untuk levelnya adik-adik

ini adalah level laboran ya cukup tahu

saja bahwa sudah ada metode yang

tervalidasi untuk Om lakukan unifikasi

SD di eh kita lanjut nah ini adalah

pertemuan jawab pertanyaan

working procedure atau prosedur kerja

untuk mengukur glue ke konsentrasi

glukosa nah ini penting bahwasanya

ketika kita ingin mengukur absorbansi

suatu sampel maka kita yang paling

pertama yang harus kita siapkan adalah

prepare Desember kita harus siapkan

sampelnya

kemudian setelah kita menyiapkan

sampelnya dalam hal ini karena kita

bicara Benedict maka kita siapkan sampel

yang sudah terjadi perubahan warna tinta

itu dia warna

britpop atau mungkin warna hijau

kekuningan atau kuning kehijauan ataupun

warna orange ataupun warna biru terserah

kita siapkan kita taruh di dalam tabung

reaksi setelah kita menyiapkan sampel

kita siapkan blanko nah atas ini sih

daripada blanko fungsi daripada blanko

ini adalah a

fungsi daripada blanko ini adalah

mengeksklusi mengeluarkan

semua kemungkinan zat-zat yang bisa

berpengaruh terhadap pengukuran sampel

eh menjadi seorang solusi daripada

blanko itu adalah

mengeksklusi atau mengeluarkan semua

reagen-reagen

yang berpotensi mengganggu

pembacaan sampel oke nah dalam hal ini

blanko itu kalau kita bicara blanko maka

isi daripada blanko itu adalah

semua

Reagan

terkecuali jadi semua Reagan kecuali

ingat semua Reagan kecuali

sampel

yang akan kita ukur misalnya pada kasus

ini

eh didalam tabung itu Sam sampel kan

isinya tentu ada urine

kemudian ada reagen benedict Oke

yee ada urine ada Benedict Nah sekarang

untuk blangkonya ya untuk blangkonya

maka yang kita gunakan sebagai blanko

ingat semua reagen terkecuali

sampel-sampel yang kita ingin ukur

adalah urinnya

berarti yang menjadi blanko disini

adalah Benedict nya Oke jadi yang

menjadi blanko adalah Benedict nya Nah

setelah mempersiapkan sampel dan

mempersiapkan blanko kemudian kita

sediakan dua kutub yang bersih ya dua

kutek yang bersih Misalnya ini ada satu

kosek ya ini kuvet kemudian bisa Nisa

gambar lagi kuvet yang satu ini kuvet

a-niu feat D kuvet Akita isi dengan

sampel kuvet B kita isi dan blanko oke

nah yang perlu diperhatikan pada saat

mengisi kuvet adalah ketinggian

cairannya ya ketinggian cairannya

aturan International mengatakan

bahwasanya bimal minimal tinggi cairan

dalam kuvet itu adalah 3/4 daripada

tinggi khususnya jadi kalender kita bagi

ini

kita bagi empat

12341234 tiga perempatnya 3/4 artinya

sampai di sini minimal tinggi cairan

yang harus kita isi jadi ini harus

terisi konsepnya ini dengan Semper

Begitu juga dengan blangko jadi harus

Kenapa harus tiga perempat Knight cahaya

itu akan lewat masuk di tengah-tengah

sini ya dia masuk di tengah-tengah

apabila kita mengisi cuma sampai disini

contohnya segambar gini kita cuma

mengisi cuma sampai disini sementara

cahaya lewat Disini

Nda akan absen nilai absorbansinya itu

akan error ya Alex akan mengidentifikasi

bahwa tidak ada cairan yang diisikan

perfect kosong Oke jadi kita harus

pahami ini nah

oke

setelah mengisi blanko apa aku fake

masing-masingnya khusus yang berbeda

dengan blangko dan sampel selanjutnya

kita lakukan blinking atau tebing cita

lakukan

eh kenziro and alat ya istilahnya kita

itu penjiwaan alat atau kalibrasi jadi

yang pertama-tama adalah kita masukkan

kuvet yang berisi blanko ini ke dalam

spektrofotometer Oke jadi ke dalam

spektrofotometer kita masukkan blanko

Setelah itu kita tekan Blank atau kita

tekan Zero pada masing-masing beberapa

alat itu akan berbeda tetapi otot

alat-alat yang spektrofotometer yang

kita punya di laboratorium biokimia

fauna Hai itu tulisannya Zero jadi kita

tekan tombol Zero kemudian dia akan

otomatis melakukan blanking Nah setelah

blanking mereka kita masukkan lagi kuvet

yang berisi sampel ke dalam

spektrofotometer tersebut kemudian kita

tekan

Yes untuk

tanamannya untuk mengukur sampel

tersebut dan setelah mengukur yang

setelah setelah

spektrofotometer mengukur maka akan

keluar nilai absorbansinya nah Yes

terlihat Yongki kita masuk pada tahap

tadi ukuran absorbansi nah tapi sebelum

mengukur absorbansi nya kita harus

menentukan yang namanya abserben speed

ya Puncak absorbansi adminnya Puncak

absorbansi kita harus mengukur

apa namanya free panjang gelombang

maksimum ia eh jadi kita harus mengukur

panjang gelombang maksimum Ia setelah

kita mendapatkan panjang gelombang

maksimum kemudian kita bisa sampelnya

kita ukur sentralnya pada panjang

gelombang maksimum yang telah kita

dapatkan sebelumnya ya mudah-mudahan

bisa dimengerti Nah sekarang kita lihat

ini adalah gambar dari pepper yang tadi

Eh ini yang saya maksud gambar ini

adalah Eh determination ya

determination of

adsorbent speak Yang tadi kita bahas

kalau kita lihat disini gambarnya

bahwasanya absorban Fiksi itu kita lihat

G sangat meningkat ya pada panjang

gelombang

740 nanometer ya

746 m artinya apa panjang gelombang

maksimum nya itu adalah 740

Hai Nano Netter nah pada panjang

gelombang Inilah kita harus melakukan

pengukuran absorbansi

eh jadi ketika kita sudah eh apa ketika

kita melakukan blanking maka kita harus

set panjang gelombangnya ke 740

nanometer Eh nah kemudian gambar yang by

ini

menunjukkan ini sebenarnya hasil

penelitiannya ini 10 yang penting adalah

gambar-gambar B ini misterius aja

eh gambar b ini menunjukkan Oh apa

namanya

hubungan antara serapan ya hubungan

antara

serapan

jadi sumbu-x ini adalah konsentrasi

CuSO4 nyato kupu-kupu oksida

cu2o dalam hal ini kalau kita

menggunakan

prinsip kita ya kemudian yang sumbu y

ini adalah absorbansinya kita lihat di

sini dia menunjukkan garis lurus seperti

ini ya garis linier kemudian kita lihat

ya konstanta linieritas nya er squarenya

daerah kuadratnya itu adalah

sangat-sangat mendekati 10 koma 99 itu

artinya kalium 99 itu sangat linier

hubungannya yang kita harapkan ini

adalah hubungan yang linear hubungan

yang linier musiknya apa makin tinggi

konsentrasi daripada qupro oksidanya

makin tinggi juga absorbansinya dan

makin tinggi konsentrasi pupuk sidak

makin tinggi absorbansinya sehingga itu

sesuai dengan Hukum pir lembar Oke kita

lanjut Nah

sekarang contoh-contoh lain lagi kalau

misalnya kita diberikan soal seperti ini

kemudian ini soalnya adalah eh apa lagi

manakah Berapakah panjang gelombang

maksimum nya Berapakah panjang gelombang

maksimum nya Nah kalau kita lihat di

sini ya ada dua picking terbentuk ada

dua Puncak yang terbentuk ada Puncak

Katakanlah ini adalah puncak a.dan

Katakanlah ini adalah puncak B isi

daerah sini dan daerah sini nah puncak

itu Yap panjang gelombangnya itu = 5 40

ya Yang ini

kemudian B itu ya kita bulatkanlah ya

sekitar

580

artinya apa kita harus mengukur

absorbansi kita harus mengukur

absorbansi dua kali pada panjang

gelombang tips yang pertama yaitu

540 dan panjang perut gelombang it yang

kedua yaitu 583

10 eh jadi kita harus menghitung apa

namanya kita harus menghitung dua kali

absorbansi sehingga nanti akan ada dua

nilai absorbansi absorbansi pertama dan

absorbansi

kedua jadi apabila pada saat tahap yang

tadi yang saya katakan determination of

absorban Spike kita dapatkan dua kali

absorbansi ya kita dapatkan dua kali

absorbansi disini sore kita dapatkan dua

kali absorbansi maka kita harus mengubah

sore dua kali panjang gelombang maksimum

maka kita harus mengukur dua kali

observasi absorbansi pada panjang

gelombang maksimum yang pertama dan

panjang gelombang maksimum yang kedua

Oke jadi cukup sampai

disini untuk

materi atau kasus yang pertama Ya kita

sambung ke kedua untuk kasus yang kedua

mengenai enzim selama alaikum

warohmatullohi wabarokatuh