4.2. Cromatografía de Líquidos

Summary

En este video, Lucía Guardiola, profesora de la Universidad Católica de Murcia, explica cómo funciona un equipo de HPLC (cromatografía líquida de alta resolución). Se detalla el proceso para identificar, cuantificar y purificar componentes de muestras complejas. La explicación incluye el uso de fases móviles y estacionarias, el papel de los detectores (como el diodo array y la fluorescencia), y la importancia de seleccionar adecuadamente condiciones como la fase móvil, el tipo de columna y los métodos de extracción. Este equipo es esencial en laboratorios de control de calidad para detectar compuestos como vitaminas, proteínas y plaguicidas.

Takeaways

• 👩‍🏫 La profesora Lucía Guardiola explica conceptos de HPLC (Cromatografía de Alta Presión Líquida).
• 🔍 HPLC se utiliza para identificar, cuantificar y purificar componentes de muestras complejas.
• 💧 En HPLC, se emplea una fase móvil (agua) y una fase estacionaria (modificador orgánico como acetonitrilo y metanol).
• 🚀 La bomba inyecta la muestra a un caudal constante, lo que es crucial para medir tiempos de retención.
• 🧪 La muestra se inyecta en un vial y pasa por una columna cromatográfica donde se separa según su afinidad.
• 🧲 La fase estacionaria, compuesta de sílice unida a grupos hidrocarbonados, interactúa con la muestra.
• 🔎 Se utiliza un detector de diodo array para medir la absorción de radiación electromagnética por los compuestos.
• 🌐 La elección de la fase móvil, la columna y el detector depende de los componentes a analizar.
• 📊 El cromatógrafo muestra picos que representan a los distintos componentes identificados en la muestra.
• 🍊 Por ejemplo, se puede determinar la concentración de vitamina C en zumo mediante comparación con un estándar.
• 🌟 La cromatografía líquida tiene aplicaciones en diversos campos como la agroalimentaria, la farmacéutica y el control de plaguicidas.

Q & A

¿Qué es un equipo de HPLC y para qué sirve?

Un equipo de HPLC (Cromatografía Líquida de Alta Resolución) es un dispositivo que permite identificar, cuantificar y purificar muestras complejas separando sus distintos componentes. Es esencial en laboratorios de control de calidad, especialmente en industrias alimentarias y farmacéuticas.

¿Cómo funciona la cromatografía en fase reversa?

La cromatografía en fase reversa utiliza agua y un modificador orgánico como acetonitrilo o metanol. La muestra pasa a través de una columna cromatográfica que contiene una fase estacionaria, lo que permite separar los componentes según su afinidad con la fase estacionaria o móvil.

¿Qué es una fase estacionaria en cromatografía líquida?

La fase estacionaria es una parte de la columna cromatográfica, compuesta por sílice unida a grupos hidrocarbonados. Los componentes de la muestra pueden quedar retenidos en esta fase según su afinidad, lo que permite su separación de otros compuestos.

¿Cuál es el rol de la fase móvil en la cromatografía líquida?

La fase móvil es el líquido que se utiliza para transportar la muestra a través de la columna cromatográfica. Si un componente es más afín a la fase móvil, pasará rápidamente por la fase estacionaria. En fase reversa, la fase móvil puede estar compuesta por agua y un modificador orgánico.

¿Cómo se detectan los componentes de una muestra en la cromatografía líquida?

La detección en cromatografía líquida se realiza mediante detectores que aprovechan propiedades físicas del compuesto o de la fase móvil. Un detector común es el diodo array, que mide la absorción de radiación electromagnética de los compuestos al pasar a través de una longitud de onda específica.

¿Qué tipo de detectores se utilizan en la cromatografía líquida?

Se utilizan varios tipos de detectores, como el diodo array, que es un detector UV-visible universal, y los detectores de fluorescencia, que son más selectivos pero solo funcionan con compuestos fluorescentes.

¿Qué información nos proporciona un cromatograma?

Un cromatograma muestra los picos cromatográficos de los distintos componentes de la muestra. Cada pico corresponde a un componente que ha sido separado en la columna, indicando el tiempo que tardó en salir y su área, lo que ayuda a identificar y cuantificar los componentes.

¿Cómo se correlaciona un pico cromatográfico con un compuesto específico?

Para identificar un compuesto, se utiliza un estándar de concentración conocida. Si un pico en la muestra aparece al mismo tiempo que el del estándar, y su área es similar, se puede correlacionar ese pico con el compuesto estándar.

¿Qué aplicaciones tiene la cromatografía líquida en la industria alimentaria?

En la industria alimentaria, la cromatografía líquida se utiliza para detectar vitaminas, proteínas, aditivos, micotoxinas, y plaguicidas en bajas concentraciones. Es una herramienta indispensable en los laboratorios de control de calidad.

¿Qué consideraciones deben tomarse en cuenta antes de realizar una cromatografía líquida?

Es crucial seleccionar adecuadamente la fase móvil, la columna cromatográfica, el volumen de inyección, la temperatura de trabajo, el flujo, y la longitud de onda para obtener resultados precisos en la cromatografía líquida.