CROMATOGRAFÍA HPLC

lidia villagomez

23 Nov 202014:36

Summary

TLDREl video explica detalladamente la cromatografía HPLC (High Performance Liquid Chromatography), una técnica de separación de compuestos mediante la interacción de una fase móvil líquida y una fase estacionaria en una columna. A diferencia de la cromatografía de gases, no está limitada por la volatilidad o estabilidad térmica de las muestras, permitiendo separar macromoléculas y especies iónicas. Se describen los componentes principales del equipo HPLC, incluyendo la columna C18, el inyector, la bomba y los detectores. También se mencionan aplicaciones en bioquímica, industria alimentaria y química forense, resaltando su importancia en el análisis de diversas muestras complejas.

Takeaways

📊 La cromatografía HPLC (High Performance Liquid Chromatography) es un tipo de cromatografía en columna que utiliza una bomba para hacer pasar una mezcla de analitos a través de una fase móvil y una fase estacionaria.
🧪 La fase móvil es un líquido que fluye a través de una columna que contiene la fase estacionaria, permitiendo la separación de compuestos en función de su afinidad con ambas fases.
🚫 A diferencia de la cromatografía de gases, la HPLC no está limitada por la volatilidad o estabilidad térmica de las muestras, lo que la hace adecuada para analizar macromoléculas y especies iónicas.
🧬 La HPLC es útil para separar productos naturales, materiales poliméricos y grupos funcionales de alto peso molecular.
🛠️ El equipo HPLC incluye un inyector para la muestra, una columna cromatográfica (la más común es la C18), un detector (que puede ser UV, IR o espectrometría de masas), y un software para visualizar los resultados en un cromatograma.
🧱 Las columnas cromatográficas se nombran por la estructura de hidrocarburos unida a la sílica, siendo la C18 la más utilizada debido a su cadena de 18 carbonos.
🔬 Los detectores en HPLC convierten las separaciones en señales que luego son interpretadas por el software, permitiendo cuantificar y analizar los analitos.
💧 La fase móvil en HPLC debe tener un grado de pureza elevado, llamado 'grado HPLC', para evitar la obstrucción del equipo.
🚰 La bomba en el HPLC es clave para proporcionar el flujo y presión adecuados, manteniendo un sistema constante para la separación efectiva de los analitos.
🏭 La cromatografía HPLC tiene aplicaciones en diversas áreas, como la caracterización de antibióticos, esteroides, proteínas, carbohidratos, contaminantes, y drogas en medicina forense.

Q & A

¿Qué significa HPLC y en qué consiste esta técnica?
-HPLC significa 'High Performance Liquid Chromatography' o Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia. Es una técnica en la que una mezcla de compuestos se separa al pasar a través de una columna cromatográfica con la ayuda de una fase móvil líquida, bajo la acción de una bomba.
¿Cuál es la principal diferencia entre la cromatografía de gases y la cromatografía HPLC?
-La principal diferencia es que la cromatografía de gases requiere que las muestras sean volátiles y térmicamente estables, mientras que la cromatografía HPLC no tiene esta limitación, lo que permite analizar macromoléculas y especies iónicas.
¿Qué papel desempeña la fase móvil en la cromatografía HPLC?
-La fase móvil en HPLC es un líquido que fluye a través de la columna cromatográfica y facilita la separación de los compuestos en función de su afinidad con la fase estacionaria o la fase móvil.
¿Por qué es importante la elección de la columna cromatográfica en HPLC?
-La elección de la columna cromatográfica es crucial porque afecta directamente la separación de los analitos. La columna más común es la C18, que contiene una estructura de 18 carbonos unida a una sílica, lo que influye en las características de la separación.
¿Qué son las fases estacionaria y móvil en la cromatografía HPLC?
-La fase estacionaria es la columna que contiene un material, como la sílica, y la fase móvil es un líquido que fluye a través de esta columna. La separación ocurre en función de las interacciones de los compuestos con estas dos fases.
¿Qué tipos de detectores se utilizan en HPLC y cuál es su función?
-En HPLC se pueden utilizar detectores ultravioleta, infrarrojo o de espectrometría de masas. Su función es detectar la separación de los compuestos tras su paso por la columna y generar una señal que se puede visualizar en forma de un cromatograma.
¿Qué grado de pureza deben tener los solventes utilizados en HPLC?
-Los solventes deben tener un grado de pureza elevado, conocido como grado HPLC, para evitar la presencia de partículas o agentes externos que puedan interferir en el proceso, como obstruir la columna o el inyector del equipo.
¿Qué aplicación tiene la cromatografía HPLC en la industria química?
-En la industria química, HPLC se utiliza para caracterizar compuestos como aromáticos, tensoactivos, colorantes, así como para detectar contaminantes como fenoles, pesticidas y herbicidas.
¿Qué ventajas ofrece la HPLC respecto a otras técnicas cromatográficas?
-HPLC permite la separación de compuestos no volátiles y con alta estabilidad térmica, como macromoléculas y especies iónicas. Además, ofrece una alta selectividad debido a la posibilidad de intercambiar fases estacionarias.
¿Cómo contribuye la bomba en el funcionamiento del equipo HPLC?
-La bomba es esencial en HPLC ya que controla el flujo de la fase móvil a través del sistema, asegurando que la muestra fluya correctamente bajo una presión constante, lo que es fundamental para un análisis eficiente.