Conceptos básicos de la técnica ELISA. Protocolo del ELISA en Sandwich.

Summary

El video explica la técnica Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), utilizada para detectar y cuantificar moléculas como proteínas, hormonas y factores de crecimiento en soluciones como sangre o orina. Se describen los cuatro tipos principales de Elisa: directa, indirecta, sándwich y competitiva, con un enfoque especial en el método sándwich, que destaca por su alta sensibilidad y especificidad. El proceso incluye la preparación de la placa, la adición de anticuerpos primarios y secundarios, y la reacción con un sustrato que genera un cambio de color proporcional a la cantidad de antígeno presente, lo que permite su cuantificación mediante un espectrofotómetro.

Takeaways

• 😀 La técnica ELISA (ensayo inmunoenzimático ligado a enzima) permite cuantificar e identificar moléculas como proteínas, hormonas y factores de crecimiento en diferentes soluciones como sangre, orina y cultivos celulares.
• 😀 ELISA fue desarrollada en los años 70 para reemplazar técnicas tóxicas que utilizaban radiactividad.
• 😀 El objetivo principal de la técnica ELISA es detectar antígenos o moléculas que causan infecciones, como virus o bacterias, e incluso detectar hormonas en el organismo.
• 😀 Los antígenos son las moléculas objetivo que se desean detectar, y los anticuerpos se utilizan para reconocer estos antígenos específicos.
• 😀 Existen dos tipos de anticuerpos: monoclonales (que reconocen una sola estructura) y policlonales (que reconocen múltiples estructuras dentro del mismo antígeno).
• 😀 Los tipos fundamentales de ELISA son: directa, indirecta, sandwich y competitiva, siendo las más comunes la indirecta y la sandwich.
• 😀 En el ELISA directo, un anticuerpo está unido a una enzima que, al reaccionar con un sustrato, produce un cambio de color que indica la cantidad de antígeno presente.
• 😀 En el ELISA indirecto, se utilizan dos anticuerpos: uno primario que se une al antígeno y otro secundario que lleva la enzima para producir la señal colorimétrica.
• 😀 ELISA sandwich implica la unión de un anticuerpo a la placa, seguido de la adición del antígeno y luego otro anticuerpo que también lleva la enzima, lo que mejora la especificidad y sensibilidad.
• 😀 En el ELISA competitivo, se utiliza una cantidad conocida de antígeno en la placa, y la cantidad de antígeno en la muestra se mide en función de la intensidad del color: cuanto más color, menor cantidad de antígeno en la muestra.
• 😀 Para obtener resultados, se mide la intensidad del color usando un espectrofotómetro, lo que nos da la absorbancia o densidad óptica, que se relaciona directamente con la concentración de antígeno en la muestra.

Q & A

¿Qué es la técnica Elisa?

La técnica Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica bioquímica que permite cuantificar e identificar moléculas como proteínas, hormonas y factores de crecimiento en diferentes soluciones como sangre, orina, extractos de tejidos o cultivos celulares.

¿Por qué se desarrolló la técnica Elisa en los años 70?

La técnica Elisa se desarrolló en los años 70 principalmente para reemplazar otras técnicas más peligrosas que utilizaban radioactividad.

¿Qué tipo de moléculas se pueden detectar usando la técnica Elisa?

La técnica Elisa permite detectar diversas moléculas como proteínas, hormonas y factores de crecimiento.

¿Qué son los anticuerpos monoclonales y policlonales?

Los anticuerpos monoclonales son aquellos que reconocen una sola estructura o epítopo dentro de un antígeno, mientras que los anticuerpos policlonales son una mezcla de anticuerpos que pueden reconocer diferentes estructuras dentro de un mismo antígeno.

¿Cuáles son los cuatro tipos fundamentales de Elisa?

Los cuatro tipos fundamentales de Elisa son: Elisa directa, Elisa indirecta, Elisa tipo sándwich y Elisa competitiva.

¿Cómo funciona el Elisa directa?

En el Elisa directa, se cubre una placa de poliestireno con una solución que contiene el antígeno, luego se usa un anticuerpo marcado con una enzima para detectar el antígeno, y finalmente se añade un sustrato que cambia de color al reaccionar con la enzima.

¿Qué diferencia al Elisa indirecta del Elisa directa?

En el Elisa indirecta, se usan dos anticuerpos: uno primario que se une al antígeno y uno secundario que se une al anticuerpo primario y está marcado con una enzima. Este método es más sensible que el Elisa directa.

¿Qué es el Elisa tipo sándwich y cómo funciona?

En el Elisa tipo sándwich, se cubre la placa con un anticuerpo específico, luego se añade la muestra con el antígeno, y se utiliza un segundo anticuerpo que también se une al antígeno y está marcado con una enzima. Este método tiene alta especificidad y sensibilidad.

¿En qué situaciones se utiliza el Elisa competitivo?

El Elisa competitivo se utiliza cuando el antígeno tiene una estructura compleja o cuando la cantidad de antígeno en la muestra es muy baja. En este caso, se competirá entre el antígeno en la solución y el antígeno cubierto en la placa.

¿Qué información proporciona el espectrofotómetro en un ensayo Elisa?

El espectrofotómetro mide la intensidad del color que se desarrolla en la reacción colorimétrica. El valor de absorbancia o densidad óptica obtenido está relacionado con la concentración de antígeno en la muestra: a mayor intensidad de color, mayor concentración de antígeno.