Técnica ELISA [Teoría y Práctica]

Summary

El video de hoy presenta la técnica ELISA, una herramienta esencial en la biología y medicina para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas. Se explica cómo se realiza un ensayo indirecto y un ensayo 'sandwich' para maximizar la sensibilidad. Además, se muestra el proceso práctico paso a paso, desde la absorción del antígeno hasta el bloqueo, la reacción antígeno-anticuerpo y la amplificación con conjugados enzimáticos. Los controles negativos, positivos y de lectura son fundamentales para validar los resultados. El video también destaca la importancia de la optimización y el uso de kits listos para el diagnóstico de enfermedades específicas.

Takeaways

• 🔬 Los ensayos ELISA son utilizados para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas.
• 🔍 La técnica ELISA se conoce por las siglas EIA, que significa 'ensayo inmuno enzimático'.
• 📍 El proceso básico del ensayo incluye la adsorción del antígeno en una superficie sólida, la unión de anticuerpos específicos y la revelación de la reacción mediante una enzima.
• 📈 La densidad óptica medida en el ensayo es proporcional a la cantidad del complejo antígeno-anticuerpo formado.
• 🔑 El ensayo indirecto aumenta la sensibilidad del método mediante la reacción de anticuerpos específicos con un segundo anticuerpo anti-especie conjugado a una enzima.
• 🏥 Los ensayos ELISA se usan en el diagnóstico de enfermedades infecciosas, como la detección de anticuerpos anti-VIH en el plasma sanguíneo.
• 🧪 La técnica 'sandwich' de ELISA permite detectar la presencia de un antígeno específico, como una proteína, mediante la captura y la reacción con anticuerpos adicionales.
• 🤰 Se utiliza el ensayo 'sandwich' para el diagnóstico del embarazo, detectando la hormona gonadotropina coriónica humana en orina o sangre.
• 🦠 Los ensayos ELISA también son útiles para el diagnóstico de la COVID-19, identificando antígenos específicos del virus en muestras de sangre o saliva.
• 🏠 Existen versiones caseras de los ensayos ELISA, lo que permite su uso en entornos no laboratoriales.
• 🛠️ Es importante optimizar cada paso del ensayo ELISA, ya que implica múltiples variables y es necesario adaptar el protocolo a los requisitos específicos de cada caso.

Q & A

¿Qué técnica se discute en el video de hoy?

El video de hoy discute la técnica ELISA (Ensayo de Inmunoenzima Asociado), una técnica utilizada para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas.

¿Cuál es el propósito de los ensayos ELISA?

Los ensayos ELISA están diseñados para detectar y cuantificar sustancias específicas en una muestra, como anticuerpos, antígenos y hormonas.

¿Qué es el ensayo indirecto en ELISA y cómo aumenta la sensibilidad del método?

El ensayo indirecto es una técnica en la que los anticuerpos específicos unidos al antígeno reaccionan con un segundo anticuerpo antiespecie, lo que produce una amplificación del primer complejo inmune y, al estar conjugado a una enzima, da lugar a una mayor sensibilidad en la detección.

¿Cómo se utiliza la técnica ELISA en el diagnóstico de enfermedades infecciosas?

La técnica ELISA se utiliza para el diagnóstico de enfermedades infecciosas a través de la detección de anticuerpos específicos que nuestro cuerpo produce para combatir las infecciones, como en el caso de la detección del VIH.

¿Qué es el ensayo 'sandwich' en ELISA y para qué se utiliza?

El ensayo 'sandwich' es una técnica de ELISA utilizada para detectar la presencia de un antígeno específico. Se emplean dos tipos de anticuerpos, donde el primero captura el antígeno y el segundo se une a este, formando un complejo que permite la detección.

¿En qué consiste el proceso de 'coating' en un ensayo ELISA y cómo se realiza?

El 'coating' es el proceso de absorción del antígeno en la fase sólida, generalmente en la superficie de un pocillo de una placa. Se incuba una solución con exceso de antígeno y luego se descarta el líquido, secando la superficie con papel absorbente.

¿Qué es el 'bloqueo' en un ensayo ELISA y cuál es su propósito?

El 'bloqueo' es el proceso de agregar una proteína irrelevante para ocupar las zonas no cubiertas por antígeno en la fase sólida, evitando así la interacción no específica de los anticuerpos con el material de la placa.

¿Qué sucede durante la reacción antígeno-anticuerpo en un ensayo ELISA y cómo se lleva a cabo?

Durante la reacción antígeno-anticuerpo, la muestra se pone en contacto con el antígeno absorbido en la superficie sólida. Los anticuerpos específicos, si están presentes, se unen al antígeno. Después de incubar y lavar, se separan los anticuerpos no unidos del complejo antígeno-anticuerpo.

¿Cómo se realiza la amplificación en un ensayo ELISA y qué se utiliza para ello?

La amplificación se realiza mediante la reacción de un anticuerpo antiespecie conjugado con una enzima, como la peroxidasa, que reacciona con los anticuerpos unidos al antígeno. Esto permite la detección del complejo formado a través de la conversión de un sustrato en un producto coloreado.

¿Qué son los controles y cómo son importantes en un ensayo ELISA?

Los controles son muestras que se utilizan para validar el proceso del ensayo ELISA. Incluyen controles negativos, positivos y blancos de lectura, que ayudan a determinar si la técnica está funcionando correctamente y a establecer puntos de corte para la interpretación de los resultados.

¿Cómo se pueden utilizar los kits de ELISA listos para el diagnóstico de enfermedades específicas?

Los kits de ELISA listos para el diagnóstico de enfermedades específicas son preparados para facilitar la detección de marcadores biológicos asociados a ciertas enfermedades, permitiendo a los investigadores y médicos realizar análisis más rápidos y precisos.