Tips for Successful Genomic DNA Extraction from Blood Samples

Summary

Este video ofrece valiosos consejos para la purificación exitosa de ADN genómico a partir de muestras de sangre. Se abordan aspectos como la cantidad adecuada de material de inicio, las condiciones de almacenamiento y lisis, y cómo la sangre fresca, almacenada a 4-8°C o congelada afecta la calidad y el rendimiento del ADN. Además, se recomienda añadir enzimas como RNase A y Proteinase K para proteger el ADN de la degradación. Se sugiere almacenar las muestras en -80°C para su conservación a largo plazo y se invita a contactar a los científicos para más ayuda.

Takeaways

• 😀 Las muestras de sangre deben ser recolectadas en un vacutainer con anticoagulante para evitar la coagulación.
• 😀 El kit Monarch es adecuado para procesar muestras de sangre almacenadas en cualquier anticoagulante.
• 😀 La cantidad de material de partida es crucial para la purificación del ADN, especialmente en muestras de sangre nucleada, como las de aves y reptiles.
• 😀 Las muestras de sangre de mamíferos requieren un mayor volumen debido a la presencia de células rojas no nucleadas.
• 😀 El almacenamiento y las condiciones de lisis de las muestras de sangre son factores importantes para el éxito de la extracción de ADN.
• 😀 Las muestras de sangre recién extraídas son más difíciles de lisar, por lo que se recomienda aumentar el tiempo de lisis de 5 minutos a 10 o 15 minutos.
• 😀 Las muestras frescas de sangre pueden dar lugar a un ADN de mayor tamaño de pico, pero los rendimientos suelen ser menores que con sangre un poco más vieja.
• 😀 Las muestras almacenadas a 4-8 °C durante 2 a 5 días son más fáciles de lisar y pueden generar rendimientos más altos, aunque el tamaño del pico de ADN puede ser ligeramente inferior.
• 😀 Es importante resuspender las muestras almacenadas a 4 °C antes del procesamiento, ya que las células tienden a sedimentarse.
• 😀 Las muestras de sangre fresca no deben almacenarse a 4-8 °C por más de una semana, ya que las leucocitos se vuelven inestables y degradan el ADN.
• 😀 Para muestras de sangre no congeladas, se debe agregar RNasa A y Proteinasa K antes de la lisis para evitar la degradación del ADN por nucleasas.
• 😀 Las muestras de sangre congeladas dan un ADN de excelente calidad, pero no deben descongelarse antes de la purificación, ya que los cristales de hielo dañan las células y las nucleasas degradan el ADN.
• 😀 Se recomienda almacenar las muestras de sangre a -80°C para su archivo a largo plazo.

Q & A

¿Qué tipo de anticoagulante se usa generalmente en las muestras de sangre?

Las muestras de sangre se recogen generalmente en un vacutainer que contiene un anticoagulante para prevenir la coagulación.

¿Qué tipo de muestras de sangre se pueden procesar con el Kit Monarch?

El Kit Monarch se puede usar para procesar muestras de sangre almacenadas en cualquier tipo de anticoagulante.

¿Cuánto material inicial es necesario para la purificación de ADN genómico de muestras de sangre?

Es importante utilizar la cantidad correcta de material inicial. Las muestras de sangre nucleada, como las de aves y reptiles, requieren menos sangre, mientras que las de mamíferos necesitan mayor cantidad.

¿Por qué las muestras de sangre fresca son más difíciles de lisar?

Las muestras de sangre fresca son más difíciles de lisar porque los glóbulos rojos no están nucleados, lo que hace que el proceso de lisis sea más lento.

¿Cómo influye el almacenamiento de las muestras de sangre en el éxito de la preparación de ADN?

El almacenamiento y las condiciones de lisis de las muestras de sangre son cruciales. Las muestras frescas son más difíciles de lisar, pero las muestras almacenadas entre 4-8 °C durante 2-5 días son más fáciles de lisar y pueden dar mayores rendimientos.

¿Qué sucede si las muestras de sangre se almacenan a 4°C durante demasiado tiempo?

Si las muestras de sangre se almacenan a 4°C por demasiado tiempo, los leucocitos se vuelven inestables y las nucleasas degradan el ADN.

¿Es adecuado almacenar sangre fresca a 4-8 °C durante más de una semana?

No, las muestras de sangre fresca no deben almacenarse a 4-8 °C por más de una semana, ya que los leucocitos se desintegran y las nucleasas degradan el ADN.

¿Qué debe añadirse a las muestras de sangre no congeladas antes de la lisis?

A las muestras de sangre no congeladas se les debe añadir RNasa A y Proteinasa K antes de agregar el buffer de lisis para degradar rápidamente las nucleasas que se liberan durante la lisis.

¿Por qué no deben descongelarse las muestras de sangre antes de la purificación?

Las muestras de sangre congeladas no deben descongelarse antes de la purificación porque los cristales de hielo dañan las estructuras celulares de los leucocitos durante la congelación, lo que provoca que las nucleasas degraden rápidamente el ADN durante el descongelamiento.

¿A qué temperatura se debe incubar la muestra congelada después de agregar RNasa A, Proteinasa K y buffer de lisis?

Después de agregar RNasa A, Proteinasa K y buffer de lisis, la muestra congelada debe incubarse inmediatamente a 56 °C para proteger el ADN de las nucleasas mientras la muestra se descongela.