Citometria de flujo

Rodrigo Blanco

1 Apr 201106:05

Summary

TLDRLa citometría de flujo es una técnica fundamental para la caracterización fenotípica celular, analizando la dispersión de luz cuando las células pasan a través de un rayo láser. Un citómetro de flujo incluye un láser, un sistema de flujo y detectores que registran características celulares. La fluorescencia, generada mediante anticuerpos conjugados con fluorocromos, permite identificar antígenos específicos en las células. Los datos se representan gráficamente en histogramas y gráficos bidimensionales o tridimensionales, facilitando el diagnóstico diferencial en muestras celulares complejas.

Takeaways

🔬 La citometría de flujo es una técnica de análisis que permite la caracterización fenotípica celular mediante el estudio de la dispersión de luz al atravesar un rayo láser.
💡 Los componentes fundamentales de un citómetro de flujo incluyen un rayo láser, un sistema de flujo, detectores luminosos y fluorescentes, y un sistema electrónico de registro de información.
🔍 La penumbra generada por la célula al atravesar el láser es proporcional a su tamaño y puede ser detectada por un receptor luminoso.
🌈 La difracción de luz por los orgánulos intracelulares es proporcional a la complejidad del citoplasma celular y se mide con un receptor lumínico colocado perpendicularmente al láser.
🔗 Mediante reacciones antígeno-anticuerpo, se pueden marcar las células con sustancias fluorescentes para detectar diferentes antígenos en una misma célula.
🧪 Los anticuerpos conjugados con fluorocromos permiten la emisión de luz de longitudes de onda específicas al ser estimulados por el láser.
📊 Se pueden crear combinaciones de anticuerpos y fluorocromos para detectar múltiples antígenos en las células, lo que facilita la identificación celular.
📈 Los histogramas representan la presencia de un único parámetro, mientras que los gráficos de dos parámetros permiten un diagnóstico diferencial entre diferentes linajes celulares.
🌐 Los gráficos tridimensionales, como el citograma, permiten comparar un tercer parámetro utilizando la densidad, lo que agrega una nueva dimensión a la representación de datos.
🧬 La citometría de flujo es una herramienta clave en el diagnóstico y caracterización de células, ayudando en la identificación de diferentes tipos celulares y en el análisis de enfermedades.

Q & A

¿Qué es la citometría de flujo?
-La citometría de flujo es una técnica de análisis que permite la caracterización fenotípica de las células mediante el estudio de la dispersión de luz y fluorescencia cuando las células atraviesan un rayo láser.
¿Cuáles son las partes fundamentales de un citómetro de flujo?
-Las partes fundamentales de un citómetro de flujo son un rayo láser, un sistema de flujo que contiene la preparación celular, detectores luminosos y fluorescentes, y un sistema electrónico para registrar la información.
¿Cómo se mide el tamaño de una célula en citometría de flujo?
-El tamaño de una célula se mide a través de la penumbra longitudinal generada cuando la célula atraviesa el láser, conocida como forward scatter (FSC).
¿Qué indica la complejidad del citoplasma celular?
-La complejidad del citoplasma celular se mide mediante el lado scatter (SSC), que se relaciona con la difracción de luz producida por los orgánulos intracelulares.
¿Qué papel juegan los anticuerpos en la citometría de flujo?
-Los anticuerpos son moléculas que se unen de forma específica a antígenos en la superficie celular y pueden estar conjugados con fluorocromos para detectar la presencia de estos antígenos a través de la fluorescencia emitida.
¿Qué es un fluorocromo y cómo se utiliza?
-Un fluorocromo es una sustancia que emite luz de una longitud de onda específica cuando es excitada por un láser. Se utiliza en combinación con anticuerpos para marcar células específicas en la citometría de flujo.
¿Cómo se representa la información recogida en citometría de flujo?
-La información recogida se representa en diferentes tipos de gráficos, como histogramas para un único parámetro y gráficos de dispersión (dot plots) para dos parámetros.
¿Qué es un histograma en el contexto de la citometría de flujo?
-Un histograma representa la presencia de un único parámetro, como la longitud de onda de un fluorocromo, mostrando en el eje X las diferentes intensidades y en el eje Y el número de células que emitieron luz de esa intensidad.
¿Cómo se diferencian los linajes celulares en un gráfico de dispersión?
-En un gráfico de dispersión, cada célula se representa como un punto, permitiendo visualizar la relación entre dos parámetros y distinguir entre diferentes linajes celulares según sus características de fluorescencia.
¿Qué avances se han hecho en la representación de datos en citometría de flujo?
-Se han desarrollado gráficos tridimensionales que permiten comparar tres parámetros al mismo tiempo, utilizando la altura en el gráfico para representar la densidad o intensidad de la fluorescencia.