Técnicas Básicas en el Laboratorio de Microbiología. Preparación de Medios de Cultivo

Summary

El video explica cómo preparar medios de cultivo, tanto naturales como artificiales, utilizados para el crecimiento de microorganismos. Detalla la diferencia entre medios simples y complejos, así como la importancia de ciertos nutrientes. Describe el proceso de preparación de medios líquidos y sólidos, el uso de Agar como agente solidificante, y el método de esterilización mediante autoclave. También se aborda la importancia de condiciones asépticas para evitar la contaminación, usando cabinas de flujo laminar o cerca de la llama de un mechero, para asegurar la esterilidad del proceso.

Takeaways

• 🧫 Un medio de cultivo es un sistema que permite el crecimiento de microorganismos, ya sea natural o artificial.
• 🧪 La composición del medio de cultivo depende de las necesidades nutricionales de los microorganismos que se desean cultivar.
• 💊 Algunos microorganismos necesitan sustancias específicas como vitaminas, suero o sangre para crecer.
• 🐔 Existen medios de cultivo naturales que incluyen células vivas, como embriones de pollo para ciertos virus.
• 🧬 Los medios de cultivo artificiales o sintéticos se pueden preparar a partir de componentes individuales o adquirir como deshidratados comerciales.
• 💧 Los medios líquidos no llevan agentes solidificantes, mientras que los medios sólidos usan Agar como agente solidificante.
• ⚖️ El pH del medio se ajusta adecuadamente, y en el caso de medios deshidratados comerciales, ya viene ajustado.
• 🔥 La esterilización de los medios de cultivo generalmente se realiza en autoclaves a 121°C durante 20 minutos.
• 💨 Las cabinas de flujo laminar utilizan filtros HEPA para crear un ambiente estéril para manipular medios de cultivo.
• 🔬 Los tubos con medios sólidos se solidifican a temperatura ambiente y las placas de Petri se almacenan en posición invertida para evitar contaminación.

Q & A

¿Qué es un medio de cultivo?

Un medio de cultivo es un sistema natural o artificial que permite el crecimiento de microorganismos. Su composición varía según la especie que se quiera cultivar, ya que las necesidades nutricionales de los microorganismos son diferentes.

¿Qué tipos de microorganismos requieren medios de cultivo más específicos?

Microorganismos más exigentes, como aquellos que necesitan sustancias especiales como vitaminas, suero o sangre, requieren medios de cultivo más específicos. Ejemplos incluyen Treponema pallidum y Mycobacterium leprae, que no pueden cultivarse en medios artificiales y necesitan animales vivos para su cultivo.

¿Cuál es la diferencia entre los medios de cultivo naturales y los artificiales?

Los medios naturales incluyen células vivas, como embriones de pollo o bacterias para bacteriófagos. Los medios artificiales, también llamados sintéticos, son preparados en laboratorio y pueden adquirirse comercialmente como medios deshidratados.

¿Qué es el agar y por qué se utiliza en medios de cultivo sólidos?

El agar es un polímero sulfatado extraído del alga Gelidium, utilizado como agente solidificante en medios de cultivo. Se funde en agua hirviendo y permanece líquido hasta que se enfría a 40-45°C, momento en el que se solidifica, proporcionando un soporte sólido para el crecimiento de microorganismos.

¿Cómo se prepara un medio de cultivo deshidratado comercialmente?

Para preparar un medio deshidratado, se pesa la cantidad de polvo indicada por el fabricante según el volumen a preparar, se añade agua y se disuelve completamente. Luego, se ajusta el pH si es necesario y se esteriliza.

¿Cómo se distribuyen los medios líquidos y sólidos en tubos o matraces?

Los medios líquidos se distribuyen en tubos o matraces con la ayuda de probetas o pipetas. Para los medios sólidos con agar, primero se funde el agar, se hierve el medio, y luego se distribuye la cantidad adecuada en cada tubo antes de dejarlo solidificar.

¿Cómo se esterilizan los medios de cultivo?

La esterilización se realiza en autoclave, un sistema cerrado donde se somete el agua a vapor a alta presión (121°C y 1 atmósfera) durante 20 minutos. Esto desnaturaliza las enzimas, mata los microorganismos y destruye las esporas.

¿Qué precauciones se deben tomar al utilizar un autoclave?

Es importante no abrir el autoclave hasta que el manómetro marque cero para evitar accidentes. Además, cuando se usan frascos con tapa de rosca, se debe dejar la tapa ligeramente abierta para permitir la entrada de vapor.

¿Cómo se realiza el proceso de vertido de medios en placas de Petri?

Después de esterilizar los medios y dejarlos enfriar a unos 50°C, las placas de Petri, que ya están estériles, se llenan en condiciones asépticas, preferiblemente en una cabina de flujo laminar o cerca de una llama de mechero para evitar la contaminación.

¿Qué es una cabina de flujo laminar y cómo ayuda en el proceso de preparación de medios?

Una cabina de flujo laminar es un sistema que utiliza filtros de alta eficacia (filtros HEPA) para eliminar el 99,97% de las partículas de 0,3 micras del aire. Esto crea un flujo de aire estéril, protegiendo los medios de cultivo de la contaminación durante el proceso de vertido.