Tinción de Gram | | UPV

Summary

En este video, Ana González, profesora del Departamento de Biotecnología de la Universidad Politécnica de Valencia, explica detalladamente el proceso de tinción de Gram, una técnica esencial en microbiología para diferenciar bacterias. A través de este procedimiento, se distinguen las bacterias Gram positivas y Gram negativas según la estructura de su pared celular. La explicación cubre desde la preparación de la muestra, el uso de colorantes como la violeta de genciana y la fucsina, hasta la observación microscópica. Además, se discuten las variaciones que pueden presentarse en cultivos bacterianos de diferentes edades, resaltando la importancia de la tinción para la clasificación bacteriana.

Takeaways

• 😀 La tinción de Gram es un procedimiento diferencial utilizado en microbiología para diferenciar bacterias según las características de su pared celular.
• 😀 La pared celular de las bacterias Gram positivas es gruesa y está compuesta principalmente de peptidoglicano, mientras que las Gram negativas tienen una capa delgada de peptidoglicano y una membrana externa.
• 😀 Los objetivos de aprendizaje incluyen realizar tinciones bacterianas, aprender a manejar el microscopio, y distinguir diferentes morfotipos bacterianos.
• 😀 Los materiales necesarios para realizar la tinción de Gram incluyen un portaobjetos, pinzas, un Asa de platino, un mechero Bunsen, y varios reactivos como violeta de genciana y alcohol de 96°.
• 😀 El proceso de tinción comienza con la extensión de la muestra sobre el portaobjetos, seguido de la fijación con calor para asegurar que las células se adhieran al portaobjeto.
• 😀 El primer colorante utilizado es la violeta de genciana, que tiñe todas las células, tanto Gram positivas como negativas, de color azul violeta.
• 😀 Después se aplica una solución de Lugol como mordiente para aumentar la afinidad entre el colorante y la célula, formando un complejo insoluble dentro de la célula.
• 😀 La decoloración con alcohol es crítica, ya que las bacterias Gram positivas no se decoloran mientras que las Gram negativas sí, debido a sus diferencias en la estructura de la pared celular.
• 😀 El siguiente paso es aplicar fucsina, un colorante de contraste que tiñe de rosa las bacterias Gram negativas, que son las únicas que han perdido el colorante violeta tras la decoloración.
• 😀 La observación bajo el microscopio óptico debe realizarse con aceite de inmersión a 100x, para una visualización clara de las bacterias, utilizando la técnica adecuada para enfocar con el objetivo de inversión.

Q & A

¿Cuál es el objetivo principal de la tinción de Gram?

El objetivo principal de la tinción de Gram es diferenciar bacterias en función de las características de sus paredes celulares, específicamente distinguiendo entre bacterias Gram positivas y Gram negativas.

¿Qué tipo de microorganismos se pueden observar utilizando la tinción de Gram?

Se pueden observar bacterias, las cuales se clasificarán en dos grupos: Gram positivas (que se tiñen de azul/violeta) y Gram negativas (que se tiñen de rosado).

¿Cuáles son los materiales necesarios para realizar la tinción de Gram?

Los materiales necesarios son un portaobjetos, cristalizador, paralelas, pinzas, un asa de platino, mechero Bunsen, microscopio, aceite de inversión, y varios reactivos como violeta de genciana, fucsina básica diluida, solución de lugol y alcohol al 96%.

¿Por qué es importante secar la muestra antes de fijarla?

Es importante secar la muestra para evitar que el agua interfiera con el proceso de tinción y para asegurar que las células se adhieran adecuadamente al portaobjetos durante el proceso de fijación.

¿Cuál es la función del lugol en la tinción de Gram?

El lugol actúa como mordiente, aumentando la afinidad entre el colorante y la célula, formando un complejo insoluble dentro de la célula que ayuda a retener el colorante durante el proceso de decoloración.

¿Por qué se realiza el paso de decoloración con alcohol y cuál es su importancia?

La decoloración con alcohol es crítica porque permite diferenciar entre bacterias Gram positivas y Gram negativas. Las Gram positivas no se decoloran debido a su gruesa capa de peptidoglicano, mientras que las Gram negativas pierden el colorante debido a su capa lipídica exterior.

¿Qué ocurre si se decolora por un tiempo excesivo?

Si la decoloración se prolonga demasiado, se corre el riesgo de que tanto las bacterias Gram positivas como Gram negativas pierdan el colorante, y las Gram positivas podrían teñirse de manera incorrecta como si fueran Gram negativas.

¿Qué tipo de morfologías bacterianas se pueden observar al microscopio tras realizar la tinción de Gram?

Se pueden observar diversas morfologías, como cocos (esféricos), bacilos (alargados), y pueden aparecer aislados, en parejas, cadenas o racimos. Además, algunas bacterias como los bacilos pueden tener esporas que no se tiñen con la tinción de Gram.

¿Cuál es la diferencia clave entre las bacterias Gram positivas y Gram negativas?

La diferencia clave está en la pared celular. Las Gram positivas tienen una capa gruesa de peptidoglicano que retiene el colorante, mientras que las Gram negativas tienen una capa más delgada de peptidoglicano y una membrana externa lipídica que facilita la decoloración.

¿Qué se debe hacer al usar el objetivo de 100x en el microscopio?

Cuando se usa el objetivo de 100x, se debe colocar el condensador en la parte más alta, añadir una gota de aceite de inversión sobre la muestra y bajar el objetivo con cuidado hasta que toque el aceite, luego enfocar cuidadosamente con el tornillo micrométrico.