Técnicas inmunológicas | Inmunofluorescencia

Summary

Este video explica la técnica de inmunofluorescencia, una metodología de inmunoensayo que utiliza anticuerpos conjugados con flúoroforo. Se describen los métodos directos e indirectos, con énfasis en la alta sensibilidad del último. Se detalla el proceso de preparación de muestras, la utilización de microscopio de fluorescencia y confocal para visualizar la reacción. Además, se discuten los marcadores fluorescentes y su importancia en la visualización de la reacción. Se aplica la técnica para detectar enfermedades infecciosas y autoinmunes, destacando su relevancia en el diagnóstico de lupus eritematoso sistémico con nefropatía.

Takeaways

• 🔬 La inmunofluorescencia es una técnica de inmunoensayos que utiliza anticuerpos conjugados con un flúor para detectar antígenos o anticuerpos específicos.
• 🔍 Existen dos tipos de inmunofluorescencia: directa, donde el anticuerpo conjugado se une directamente al antígeno, y indirecta, que utiliza un segundo anticuerpo para aumentar la sensibilidad.
• 🏥 La inmunofluorescencia indirecta es más lenta pero más confiable, ya que permite la unión de múltiples anticuerpos secundarios a un solo anticuerpo primario.
• 🌟 Se requiere un microscopio especial para la inmunofluorescencia, ya que la muestra emitirá luz a una longitud de onda específica.
• 📚 El procedimiento de inmunofluorescencia en tejidos parafinadados es similar al de la inmunohistoquímica, incluyendo la exposición de antígenos, incubación con anticuerpos y lectura con un microscopio de fluorescencia o confocal.
• 💡 Los marcadores fluorescentes, como los isotiocianatos de fluoresceína y rodamina, son esenciales para visualizar la reacción en la inmunofluorescencia.
• 🔬 El microscopio confocal mejora la imagen en inmunofluorescencia al eliminar la luz de planos superiores e inferiores, permitiendo visualizaciones tridimensionales más nítidas.
• 👩‍⚕️ Las aplicaciones de la inmunofluorescencia son amplias, incluyendo el diagnóstico de enfermedades infecciosas, parasitarias, bacterianas, virales, fúngicas y autoinmunes.
• 🧬 La inmunofluorescencia indirecta es particularmente útil para la identificación de anticuerpos, como los anticuerpos anti nucleares en enfermedades autoinmunes.
• 🚫 La inmunofluorescencia indirecta puede dar falsos positivos y es cualitativa, lo que la hace menos confiable que técnicas cuantitativas como la ELISA.
• 📈 El caso clínico presentado ilustra cómo la inmunofluorescencia indirecta puede ser crucial para el diagnóstico de enfermedades autoinmunes como el lupus eritematoso sistémico.

Q & A

¿Qué técnica se discute en el script del video?

El script del video discute la técnica de inmunofluorescencia, que es una técnica de inmunoensayos que utiliza anticuerpos conjugados con un flúor.

¿Cuál es la diferencia entre la inmunofluorescencia directa e indirecta?

La inmunofluorescencia directa implica que el anticuerpo conjugado se acopla directamente al antígeno de interés, mientras que la indirecta requiere un segundo anticuerpo, llamado anticuerpo puente, que se coloca entre el antígeno y el anticuerpo conjugado.

¿Qué ventajas y desventajas tiene el método indirecto de la inmunofluorescencia?

El método indirecto de la inmunofluorescencia es más tardado pero ofrece mayor sensibilidad, lo que resulta en un resultado más confiable debido a que múltiples anticuerpos secundarios pueden acoplar a un solo anticuerpo primario.

¿Por qué se necesita un microscopio especial para la inmunofluorescencia?

Se necesita un microscopio especial, como un microscopio de fluorescencia o confocal, para la inmunofluorescencia porque esta técnica implica la observación de un preparado que emite luz a una longitud de onda determinada.

¿Cómo se prepara el tejido para la inmunofluorescencia?

El tejido se prepara con parafina, se corta con un microtomo, se pega al portaobjetos, se expone el antígeno mediante calor y se incuba con el anticuerpo primario y luego con el anticuerpo conjugado antes de la lectura con un microscopio.

¿Qué son los marcadores fluorescentes y cómo funcionan?

Los marcadores fluorescentes son sustancias que permiten visualizar la reacción en la inmunofluorescencia. Funcionan absorbiendo una longitud de onda de luz, como los rayos ultravioleta, y emitiendo luz a una longitud de onda diferente.

¿Cuáles son los isotiocianatos de fluoresceína y de rodamina y cómo se diferencian?

Los isotiocianatos de fluoresceína y de rodamina son flúoros comunes en la inmunofluorescencia. La fluoresceína se excita con luz azul y emite luz verde, mientras que la rodamina se excita con luz roja y emite luz amarilla.

¿Cómo ayuda el microscopio confocal a mejorar la imagen en la inmunofluorescencia?

El microscopio confocal ayuda a mejorar la imagen eliminando la luz proveniente de planos superiores e inferiores al de interés mediante un diafragma focal llamado pino, lo que permite obtener imágenes tridimensionales más nítidas.

¿En qué aplicaciones se utiliza la inmunofluorescencia directa y indirecta?

La inmunofluorescencia directa se utiliza en el diagnóstico de enfermedades infecciosas, parasitarias, bacterianas, virales y fúngicas. La inmunofluorescencia indirecta, por otro lado, se utiliza para diagnosticar o monitorear enfermedades autoinmunes.

¿Qué es el lupus eritematoso sistémico y cómo se diagnostica con la inmunofluorescencia indirecta?

El lupus eritematoso sistémico es una enfermedad autoinmune que se puede diagnosticar con la inmunofluorescencia indirecta al observar un patrón homogéneo de tinción en los núcleos con mitosis positiva en células de cerdo.

¿Cómo se relaciona la infección por citomegalovirus con el desarrollo de enfermedades autoinmunes?

La infección por citomegalovirus puede desencadenar un proceso inmunológico que puede transformarse en un proceso autoinmune, lo que puede resultar en daño hepático y renal, y la generación de autoanticuerpos, como se vio en el caso clínico presentado en el script.