¿Como Funciona el FilmArray?

Summary

El sistema Film Array es una herramienta innovadora y fácil de usar para pruebas moleculares automatizadas. Comienza con una preparación de muestra integrada y termina con un análisis de resultados automatizado. A través de un proceso que incluye la lisis de células y virus, purificación de ácidos nucleicos y PCR multiplex de alta precisión, el Film Array identifica organismos específicos mediante un análisis basado en la fluorescencia. Todo el proceso es completamente automatizado, lo que permite al usuario caminar mientras el sistema realiza el trabajo. Los resultados se presentan en un informe fácil de leer.

Takeaways

• 😀 El sistema FilmArray simplifica las pruebas moleculares mediante un protocolo completamente automatizado, desde la preparación de la muestra hasta el análisis de resultados.
• 😀 Todos los reactivos necesarios para realizar la prueba están pre-cargados y liofilizados en los compartimentos del pouch FilmArray.
• 😀 El proceso comienza colocando el pouch en el bloque de carga y luego inyectando la solución de hidratación a través del puerto de entrada azul.
• 😀 La solución de muestra se añade al tampón de muestra FilmArray y luego se inyecta en el pouch a través del puerto de entrada rojo, donde el vacío asegura la cantidad correcta.
• 😀 Una vez cargado el pouch, se escanea el ID del pouch y se ingresan los datos del usuario y la muestra antes de comenzar el análisis.
• 😀 El sistema FilmArray es completamente automatizado, permitiendo al usuario alejarse mientras el sistema realiza el análisis.
• 😀 Dentro del pouch, la muestra se traslada a la cámara de lisis, donde las células y virus son rotos mediante un proceso llamado bead beating.
• 😀 Las ácidos nucleicos liberados son capturados por esferas magnéticas que se trasladan a la cámara de purificación para eliminar restos celulares y virales.
• 😀 Luego, los ácidos nucleicos purificados se trasladan a la cámara de PCR de primera etapa, donde se realiza la transcripción inversa y la amplificación mediante PCR multiplexado.
• 😀 Los productos de la PCR de primera etapa se diluyen y se combinan con una mezcla maestra para la PCR de segunda etapa, que amplifica secuencias específicas, eliminando productos no específicos.
• 😀 Los productos de PCR de segunda etapa se detectan mediante un tinte fluorescente y un análisis de temperatura para identificar organismos, con resultados procesados y entregados en un informe fácil de leer.

Q & A

¿Cómo simplifica el sistema Film Array las pruebas moleculares?

El sistema Film Array simplifica las pruebas moleculares mediante un protocolo completamente automatizado, que abarca desde la preparación integrada de la muestra hasta el análisis automatizado de los resultados.

¿Qué pasos son necesarios para comenzar una ejecución en el sistema Film Array?

Para comenzar una ejecución, se coloca la bolsa del Film Array en el bloque de carga, se inyecta una solución de hidratación a través del puerto azul, luego se agrega la muestra a un tampón y se inyecta en la bolsa a través del puerto rojo. El sistema controla automáticamente los volúmenes, eliminando la necesidad de medir o pipetear manualmente.

¿Cómo maneja el sistema Film Array la dosificación de las soluciones?

El sistema utiliza un vacío dentro de la bolsa del Film Array que extrae automáticamente el volumen correcto de las soluciones, eliminando la necesidad de medir manualmente los líquidos o hacer pipeteo preciso.

¿Qué sucede dentro de la bolsa del Film Array después de cargar la muestra?

Dentro de la bolsa, la muestra se mueve a la cámara de lisis, donde las células y los virus son rotos por las perlas cerámicas agitadas a alta velocidad, liberando los ácidos nucleicos. Luego, los ácidos nucleicos se purifican antes de ser movidos a la cámara de PCR.

¿Cómo se lleva a cabo la purificación de los ácidos nucleicos en el Film Array?

Los ácidos nucleicos liberados son capturados por perlas magnéticas, que se mueven a la cámara de purificación, donde un buffer de lavado elimina los restos celulares y virales. Luego, un buffer de elución libera los ácidos nucleicos purificados.

¿Qué ocurre durante la fase de PCR en el sistema Film Array?

En la fase de PCR, primero se realiza una transcripción inversa para convertir el ARN en ADN. Luego, se lleva a cabo una PCR multiplex de alto orden con docenas de pares de iniciadores, amplificando las secuencias deseadas de los ácidos nucleicos.

¿Cuál es la ventaja de utilizar PCR en dos etapas en el Film Array?

La PCR en dos etapas elimina productos no específicos, ya que la segunda etapa amplifica solo las secuencias del ADN objetivo. Esto mejora la precisión y especificidad de los resultados en comparación con la PCR multiplex tradicional.

¿Cómo se detectan los organismos en el Film Array?

Los organismos se detectan mediante la fluorescencia emitida por un tinte de unión al ADN de doble cadena. Cada pocillo en la matriz está pre-cargado con iniciadores específicos para un organismo particular, y los productos amplificados generan una señal positiva o negativa.

¿Cómo se confirma la presencia o ausencia de los productos de PCR en el sistema Film Array?

El sistema Film Array realiza una 'fusión' para confirmar la presencia o ausencia de los productos de PCR al medir las temperaturas de desnaturalización de los productos amplificados. Este paso asegura la especificidad de los resultados.

¿Qué tipo de informe se genera después de una ejecución en el Film Array?

Después de completar la ejecución, el software del Film Array procesa los datos y genera un informe fácil de leer que indica si los organismos objetivo están presentes o ausentes en la muestra.