How to Make an SDS-PAGE gel

Summary

In diesem Video wird der Prozess zum Gießen eines SDS-PAGE-Gels erklärt. Zuerst wird die Apparatur mit zwei Glasplatten und einem Gießrahmen vorbereitet. Nach der Überprüfung auf Lecks wird der Lösung für das Trenn- und Stapelgel die Polymerisationsreagenz hinzugefügt und sofort gegossen. Luftblasen werden entfernt, indem Isopropanol auf die Geloberfläche aufgetragen wird. Nach der Polymerisation des Trenngels wird das Stapelgel gegossen, und der Kamm wird eingesetzt. Das Video bietet eine detaillierte Anleitung zur korrekten Herstellung eines SDS-PAGE-Gels für die Proteinanalyse.

Takeaways

• 🔧 Die SDS-PAGE-Gel-Gießvorrichtung besteht aus zwei Glasplatten (einer kurzen und einer langen), einem Gießrahmen und einem Gießständer.
• 📏 Die kurze Glasplatte sollte vor der langen Glasplatte positioniert und im Gießrahmen gesichert werden.
• 💧 Vor dem Gießen des Gels sollte Wasser hinzugefügt werden, um sicherzustellen, dass die Vorrichtung dicht ist. Falls es keine Leckagen gibt, wird das Wasser mit Filterpapier entfernt.
• ✍️ Ein Marker wird verwendet, um eine Linie etwa 1 cm unterhalb des Kamms zu zeichnen, um die Gießhöhe des Gels zu bestimmen.
• ⚠️ Nach dem Hinzufügen des Polymerisationsinitiators (TATE) sollte das Gel sofort gegossen werden, um die Polymerisation zu starten.
• 💨 Luftblasen sind beim Gießen des Gel-Ansatzes nicht problematisch und können später beseitigt werden.
• 🧪 Eine dünne Schicht Isopropanol wird auf die Oberfläche des Gels aufgetragen, um Luftblasen zu entfernen und eine gleichmäßige Oberfläche zu gewährleisten.
• ⏳ Die Polymerisation des Trenn-Gels sollte vollständig abgeschlossen sein, bevor der nächste Schritt fortgesetzt wird.
• 🧻 Nach der Polymerisation des Trenn-Gels wird das Isopropanol mit Filterpapier entfernt.
• 💡 Für das Gießen des Stapelgels sollte ebenfalls TATE hinzugefügt werden, und es ist wichtig, keine Luftblasen einzuführen, um eine gleichmäßige Bildung der Probenlöcher zu gewährleisten.

Q & A

Was sind die vier Hauptbestandteile des Apparats für das Gießen des SDS-PAGE-Gels?

Die vier Hauptbestandteile des Apparats sind zwei Glasplatten (eine kurze und eine lange), ein Gießrahmen, und ein Gießständer.

Wie stellt man sicher, dass der Gießapparat keine Lecks aufweist?

Um Lecks zu überprüfen, wird etwas Wasser zwischen die Glasplatten gegeben. Wenn keine Lecks auftreten, kann das Wasser mit Filterpapier entfernt werden.

Warum wird Isopropanol auf die aufgebrachte Gelmischung gegeben?

Isopropanol wird auf das Gel aufgetragen, um Luftblasen zu entfernen, die während des Gießens entstanden sind.

Was passiert, wenn Luftblasen während des Gießens des Gels eingeführt werden?

Luftblasen sind nicht kritisch, sie können später entfernt werden, indem eine Schicht Isopropanol auf das Gel gegeben wird.

Welche Rolle spielt TEMED beim Gießen des Gels?

TEMED wird zum Gelgemisch hinzugefügt, um die Polymerisation der Gels zu initiieren, insbesondere beim Lösen der resolvierenden und stappelnden Gele.

Was muss nach der Polymerisation des resolvierenden Gels gemacht werden?

Nach der Polymerisation des resolvierenden Gels muss das Isopropanol mit Filterpapier entfernt werden.

Wie wird das stappelnde Gel gegossen?

Das stappelnde Gel wird nach der Polymerisation des resolvierenden Gels gegossen, indem es vollständig bis zum oberen Rand des Rahmens aufgefüllt wird. Dabei sollte darauf geachtet werden, keine Luftblasen zu erzeugen.

Warum ist es wichtig, dass der Boden des Gießapparats flach ist?

Ein flacher Boden sorgt dafür, dass das Gel gleichmäßig gegossen wird und keine ungleichmäßigen Bereiche entstehen, die die Ergebnisse der Elektrophorese beeinträchtigen könnten.

Wie hoch sollte das Gel während des Gießens gefüllt werden?

Das Gel sollte bis zum markierten Punkt etwa 1 cm unterhalb des Kamms gegossen werden.

Was ist der Zweck des Kamms im Gießapparat?

Der Kamm wird zwischen die Glasplatten eingeführt, um die Vertiefungen (Löcher) zu bilden, in die später die Proben geladen werden.