Passaging Cells: Cell Culture Basics

Summary

El crecimiento celular en cultivo sigue un patrón estándar, desde la fase de latencia hasta la fase de crecimiento exponencial. Para maximizar la salud celular, es crucial mantener las células en la fase logarítmica y realizar el subcultivo cuando las células cubren la placa o la densidad celular supera la capacidad del medio. Durante la disociación, se recomienda el uso de soluciones suaves como TrypLE Express para evitar daños. Posteriormente, se realiza el conteo celular con trypan azul para evaluar la viabilidad. Finalmente, se añaden medios frescos y se distribuyen las células en nuevos frascos para su incubación.

Takeaways

• 😀 Las células en cultivo siguen un patrón de crecimiento estándar, comenzando con una fase de crecimiento exponencial conocida como la fase logarítmica.
• 😀 Las células deben pasarse cuando cubren la placa o cuando la densidad celular supera la capacidad del medio de cultivo.
• 😀 Mantener las células en fase logarítmica optimiza la cantidad de células sanas para los experimentos.
• 😀 Antes de sacar los frascos del incubador, es importante esterilizar la campana y preparar todos los suministros necesarios.
• 😀 Examina cuidadosamente la cultura celular para detectar signos de contaminación o deterioro antes de manipularla.
• 😀 Para las células adherentes, elimina el medio agotado con una pipeta estéril y enjuaga las células con una solución salina equilibrada.
• 😀 Usa una solución salina sin calcio ni magnesio, ya que estos inhiben los reactivos de disociación celular.
• 😀 Añade un reactivo de disociación celular como TrypLE Express, que es menos agresivo y protege las células durante la disociación.
• 😀 Después de la disociación, centrifuga las células para eliminar los reactivos residuales y resuspende el pellet con medio de cultivo completo.
• 😀 Utiliza el azul de tripano para contar las células y determinar la proporción de células vivas y muertas.
• 😀 Basado en el recuento celular, ajusta la cantidad de medio fresco necesario para asegurar la densidad celular adecuada al sembrar las células.

Q & A

¿Cuál es la fase de crecimiento celular que sigue después de la siembra?

Después de sembrar las células, la fase que sigue es la fase de crecimiento exponencial, también conocida como la fase logarítmica.

¿Cuándo deben pasarse las células a otro recipiente?

Las células deben pasarse cuando cubren la placa o cuando la densidad celular excede la capacidad del medio.

¿Qué se debe hacer antes de sacar los frascos del incubador?

Antes de sacar los frascos del incubador, se debe esterilizar la campana de flujo laminar y tener todos los suministros necesarios a mano.

¿Qué se debe verificar al examinar las células antes de manipularlas?

Es importante verificar si hay signos de contaminación o deterioro en la cultura celular antes de manipular las células.

¿Qué tipo de solución se debe utilizar para enjuagar las células adherentes?

Para enjuagar las células adherentes, se debe utilizar una solución salina balanceada, como DPBS, que no contenga calcio ni magnesio, ya que estos pueden inhibir el reactivo de disociación celular.

¿Por qué es importante usar una solución de disociación suave como TrypLE Express?

El uso de una solución de disociación suave, como TrypLE Express, es importante para evitar dañar las células durante el proceso de disociación.

¿Cómo se confirma que las células se han disociado completamente?

Se puede confirmar la disociación completa de las células utilizando un microscopio. Las células se verán redondeadas y se moverán o deslizarán cuando se incline el frasco.

¿Qué se debe hacer si se usa tripsina para la disociación celular?

Si se usa tripsina, es necesario añadir suero al medio de recolección o utilizar un inhibidor de tripsina para inactivar la tripsina.

¿Qué se debe hacer después de centrifugar las células para eliminar el reactivo de disociación?

Después de centrifugar las células, se debe eliminar el medio de la tubería de centrifugado, tratando de no perturbar el pellet celular, y luego resuspender el pellet con medio de cultivo completo tibio.

¿Cómo se realiza el conteo celular y qué indica el uso de azul de trypan?

El conteo celular se realiza utilizando azul de trypan. Este tinte permite diferenciar entre células vivas y muertas: las células muertas se tiñen de azul, mientras que las células saludables permanecen sin color.