Video 4: PCR y purificación de DNA a partir de gel de agarosa

División de Investigación Facultad de Medicina-UNAM
5 Dec 202007:45

Summary

TLDREl video presenta técnicas utilizadas en un laboratorio de biología molecular y cultivo celular de la UNAM, especializado en enfermedades metabólicas, obesidad y diabetes. Explica el proceso de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para amplificar fragmentos de ADN, destacando la importancia de optimizar la reacción y los pasos para realizar el procedimiento. También describe la preparación y uso de geles de agarosa para visualizar y purificar los fragmentos de ADN amplificados, detallando el equipo, reactivos y pasos para la purificación del ADN a partir de estos geles.

Takeaways

  • 🎵 El video es parte del laboratorio de enfermedades metabólicas, obesidad y diabetes de la UNAM en el Hospital Infantil de México Federico Gómez.
  • 🧬 Se muestran técnicas de biología molecular y cultivo celular, como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y geles de agarosa.
  • 🔬 La PCR es una técnica utilizada para amplificar un segmento específico de ADN.
  • 🧪 Los geles de agarosa permiten visualizar los fragmentos de ADN amplificado y purificar las secuencias de ADN.
  • 🧫 La PCR necesita una secuencia de nucleótidos específica del gen y requiere optimización de cada reacción.
  • 🔧 La reacción de PCR se compone de un buffer de reacción, ADN polimerasa, dNTPs, cebadores (primers), y el templado de ADN.
  • 🔥 El proceso de PCR incluye ciclos de desnaturalización (95°C), alineación de cebadores y extensión (72°C).
  • 🥼 Para elaborar gel de agarosa, se disuelve la agarosa en un buffer y se calienta en el microondas hasta que esté transparente.
  • ⚡ Las muestras de ADN se cargan en el gel de agarosa y se visualizan bajo luz ultravioleta o LED tras la electroforesis.
  • 🧴 La purificación del ADN se realiza cortando el gel de agarosa y procesando el fragmento con una columna de extracción y lavados, obteniendo el ADN purificado.

Q & A

  • ¿Cuál es el objetivo principal de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR)?

    -El objetivo principal de la PCR es amplificar un segmento específico de ADN para facilitar su análisis o estudio.

  • ¿Qué componentes son necesarios para realizar una reacción de PCR?

    -Los componentes necesarios son el buffer de reacción, la ADN polimerasa, una mezcla de dNTPs, los oligonucleótidos (primers), y el ADN molde (templado).

  • ¿Cuál es la función de los geles de agarosa en este proceso?

    -Los geles de agarosa se utilizan para visualizar los fragmentos de ADN amplificados, permitiendo verificar el tamaño y la cantidad del ADN tras la PCR.

  • ¿Por qué es importante optimizar las condiciones de la PCR?

    -Es importante optimizar las condiciones de la PCR para asegurar que la amplificación sea específica y eficiente, evitando productos no deseados.

  • ¿Qué significa el 'Tm' en el diseño de oligonucleótidos?

    -El 'Tm' (temperatura de fusión) es la temperatura a la que los oligonucleótidos se alinean con precisión al ADN molde, facilitando la amplificación correcta.

  • ¿Cómo se prepara un gel de agarosa para la electroforesis?

    -Se mezcla agarosa con buffer TAE 1x, se calienta hasta que la mezcla sea translúcida, y se vierte en un molde. Tras solidificarse, se monta el gel en la cámara de electroforesis.

  • ¿Cuál es la función del buffer de carga en la preparación de muestras para correr en el gel?

    -El buffer de carga facilita la aplicación de las muestras en el gel y ayuda a seguir visualmente el progreso de la electroforesis.

  • ¿Cómo se visualiza el ADN en el gel tras la electroforesis?

    -El ADN se visualiza mediante la exposición a luz ultravioleta o luz LED, dependiendo del colorante utilizado para marcar el ADN.

  • ¿Cómo se purifica el ADN a partir del gel de agarosa?

    -El fragmento de ADN se corta del gel bajo luz UV, se transfiere a un tubo y se incuba con buffer de extracción. Luego se sigue un proceso de centrifugación y lavado con columnas especiales.

  • ¿Qué se hace después de obtener el ADN purificado de la columna?

    -El ADN purificado se eluye añadiendo agua libre de nucleasas a la columna y centrifugando, obteniendo así el ADN de interés para su uso posterior.

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