anticuerpos policlonales y monoclonales
Summary
TLDREste video explora las técnicas de inmunoensayo y la producción de anticuerpos, esenciales para diagnóstico en laboratorios de inmunología. Se explica cómo se generan anticuerpos policlonales y monoclonales mediante la inyección de antígenos en animales como ratones y conejos. A través de varios pasos, se producen anticuerpos que reaccionan con antígenos específicos. Además, se destacan técnicas de amplificación mediante enzimas, sustancias fluorescentes o radioactivas. El video también plantea preguntas clave para reforzar el conocimiento sobre el uso de estos anticuerpos en distintas técnicas diagnósticas, como la aglutinación y la inmunofluorescencia.
Takeaways
- 🔬 Los inmunoensayos son técnicas fundamentales en laboratorios de inmunología y otras áreas, utilizadas para determinar concentraciones de sustancias o células a través de la reacción antigeno-anticuerpo.
- 🐁 Se pueden obtener anticuerpos policlonales o monoclonales; los primeros son producidos generalmente en conejos y los segundos en ratones.
- 💉 La producción de anticuerpos comienza con la inyección de un antígeno en un animal de laboratorio para inducir una respuesta inmunológica.
- 🔄 Se realizan inmunizaciones secundarias para obtener una respuesta inmunológica de memoria más potente, lo que resulta en una mayor producción de anticuerpos.
- 🧬 Los anticuerpos policlonales son una mezcla dirigida hacia diferentes epítopos del antígeno, mientras que los monoclonales son específicos de un único epitopo.
- 🧪 La fusión de células B con células tumorales (mieloma) da lugar a hibridomas, que son capaces de producir anticuerpos y crecer indefinidamente.
- 🌡 Se utiliza un medio selectivo para diferenciar a las células fusionadas (hibridomas) de las no fusionadas, permitiendo la selección de las células productoras de anticuerpos.
- 🧫 A través de la técnica de dilución límite, se identifican y aíslan clones específicos de hibridomas que producen anticuerpos de interés.
- 🔎 Se realizan inmunoensayos para evaluar la reacción de los clones con el antígeno de interés, determinando así los anticuerpos monoclonales adecuados para la técnica en desarrollo.
- 📈 Los anticuerpos monoclonales se pueden producir en grandes cantidades a través de la cultivación de hibridomas en incubadores o la inyección en líquido ascítico.
Q & A
¿Qué es un inmunoensayo y por qué es importante en el laboratorio de inmunología?
-Un inmunoensayo es una técnica que utiliza la reacción entre un antígeno y un anticuerpo para determinar concentraciones de distintas sustancias o células. Es fundamental en el laboratorio de inmunología porque permite la detección y cuantificación de antigenes específicos.
¿Cuáles son las características físicas que pueden ser utilizadas en técnicas de precipitación y aglutinación?
-Las características físicas utilizadas en técnicas de precipitación y aglutinación incluyen la capacidad de dispersar la luz, la turbidez que producen en suspensión y su capacidad de precipitar o aglutinar.
¿Cómo se pueden combinar los anticuerpos con otras sustancias para ampliar su uso?
-Los anticuerpos pueden combinarse con enzimas para realizar ensayos enzimáticos, con sustancias radioactivas, aunque estas técnicas están en desuso, o con sustancias fluorescentes para realizar exámenes al microscopio o mediante fluorímetros o citómetros.
¿Qué animales se utilizan comúnmente para la producción de anticuerpos policlonales y monoclonales?
-Para obtener anticuerpos monoclonales se utiliza generalmente un ratón, mientras que para anticuerpos policlonales se suelen emplear conejos, aunque también se pueden usar otras especies como cabras o ovejas.
¿Cuál es el objetivo de inyectar un antígeno en un animal de laboratorio?
-El objetivo es inducir una respuesta inmunológica en el animal, lo que resultará en la producción de anticuerpos específicos contra el antígeno inyectado.
¿Qué sucede después de la primera inmunización con un antígeno?
-Después de la primera inmunización, se espera que el animal produzca una respuesta inmunológica primaria. A los 7 a 10 días, se realiza una segunda inmunización para obtener una respuesta secundaria de memoria más potente.
¿Cómo se obtienen los anticuerpos monoclonales a partir de la sangre del animal?
-Después de la segunda inmunización, se extrae la sangre del animal y se separa el suero para obtener una mezcla de anticuerpos. Se fusionan las células B con células tumorales para formar hibridomas, que son clonados y seleccionados para producir anticuerpos monoclonales específicos.
¿Qué es un hibridoma y cuáles son sus características?
-Un hibridoma es una célula resultante de la fusión entre una célula B y una célula tumoral (mieloma). Tiene la capacidad de crecimiento permanente del tumor y la capacidad del linfocito B de producir anticuerpos.
¿Cómo se determina si una célula B es un hibridoma que produce anticuerpos de interés?
-Se utiliza una técnica de dilución límite para sembrar células B en placas y, después de incubar, se realizan inmunoensayos para identificar a los clones que producen anticuerpos específicos frente al epítopo de interés.
¿Cómo se obtiene una gran cantidad de anticuerpos monoclonales una vez identificados los clones productivos?
-Una vez identificados los clones productivos, se realizan resemblajes en gran cantidad de líquido y se incuban para obtener una elevada cantidad de células B productoras de anticuerpos. Alternativamente, se pueden reinyectar los hibridomas en líquido ascítico para obtener una concentración elevada de anticuerpos.
Outlines
🧬 Introducción a la producción de anticuerpos
Este primer párrafo aborda el proceso de diagnóstico inmunológico, destacando la importancia de los anticuerpos en la inmunología. Se menciona que los anticuerpos pueden ser policlonales o monoclonales y cómo se pueden usar en diversas técnicas de laboratorio, como la dispersión de luz, la turbidez, la precipitación y la aglutinación. Además, se describe cómo se pueden combinar con enzimas, sustancias radiactivas o fluorescentes para ampliar su uso. Se explica que los anticuerpos se producen inyectando antígenos en animales de laboratorio, como ratones para anticuerpos monoclonales y conejos para policlonales, y se detalla el proceso de inmunización y producción de anticuerpos a través de la respuesta inmunológica.
🔬 Procedimiento para obtener anticuerpos monoclonales
El segundo párrafo se centra en el método para producir anticuerpos monoclonales. Se describe la fusión de células B del animal con células tumorales (mieloma) para crear híbridomas, que son capaces de crecer indefinidamente y producir anticuerpos. Se explica el uso de un medio selectivo para identificar las células fusionadas y la técnica de dilución límite para seleccionar clones específicos que producen anticuerpos de interés. Se detalla el proceso de replicar estos clones en condiciones controladas y cómo se identifican los anticuerpos monoclonales a través de inmunoensayos. Finalmente, se mencionan las dos formas de obtener anticuerpos en grandes cantidades: la siembra de híbridomas en líquido y la reinyección en líquido ascítico. Además, se plantean preguntas para reflexionar sobre las técnicas de inmunoensayo y la producción de anticuerpos.
Mindmap
Keywords
💡Inmunodiagnóstico
💡Anticuerpos
💡Inmunoensayo
💡Policolonales
💡Monoclonales
💡Hibridomas
💡Inmunización
💡Dilución límite
💡Epítopo
💡Conjugación
Highlights
Inmunopul diagnóstico es una técnica fundamental en el laboratorio de inmunología.
Los anticuerpos son herramientas esenciales para realizar inmunoensayos.
Los anticuerpos pueden ser policlonales o monoclonales y se utilizan para determinar concentraciones de sustancias o células.
Las técnicas de precipitación y aglutinación son fundamentales en los inmunoensayos.
Los anticuerpos pueden combinarse con enzimas, sustancias radioactivas o fluorescentes para ampliar su uso.
La producción de anticuerpos en el laboratorio requiere la inyección de antígenos en animales de laboratorio.
Los ratones son utilizados para obtener anticuerpos monoclonales, mientras que los conejos para policlonales.
La inyección de antígenos en la cavidad peritoneal del animal desencadena una respuesta inmunológica.
Una segunda inmunización mejora la respuesta inmunológica y aumenta la producción de anticuerpos.
El suero sanguíneo contiene una mezcla de anticuerpos policlonales dirigidos a diferentes epítopos del antígeno.
Para obtener anticuerpos monoclonales, se fusionan células B con células tumorales para formar hibridomas.
Los hibridomas son células capaces de reproducirse indefinidamente y producir anticuerpos.
El medio selectivo ayuda a identificar las células B que han formado hibridomas.
La técnica de dilución límite se utiliza para identificar clones específicos de anticuerpos.
Los clones que producen anticuerpos de interés se identifican mediante inmunoensayos.
Los anticuerpos monoclonales se obtienen a partir de clones específicos que reaccionan con el antígeno de interés.
Los hibridomas se pueden cultivar en gran cantidad para producir una gran cantidad de anticuerpos.
Los anticuerpos pueden ser conjugados con enzimas, sustancias fluorescentes o radioactivas para diferentes técnicas diagnósticas.
Transcripts
[Música]
Hola en esta nueva
inmunopul diagnóstico y en concreto en
ver cómo se pueden obtener las
herramientas fundamentales para poder
realizarlas los anticuerpos ya sabéis
que el inmunoensayo es la técnica por
excelencia para el laboratorio de
inmunología y otros laboratorios y
necesita amos los anticuerpos ya sean
policlonales o
monoclonales muy rápidamente porque lo
hemos visto en píldoras previas os
recuerdo que la reacción antigeno
anticuerpo que se va a usar para
determinar concentraciones de distintas
sustancias o células se puede poner de
manifiesto por las características
fisicoquímicas de estas redes como es la
capacidad de dispersar la luz la
turbidez que producen en suspensión o
incluso su capacidad de precipitar o
aglutinar son todas estas técnicas de
precipitación y aglutinación que eh
veremos en píldoras siguientes Pero
además el anticuerpo se puede combinar
con distintas sustancias lo que va a
amplificar muchísimo la diversidad o
potencialidad del uso de estas moléculas
se puede combinar con enzimas y
tendremos eh técnicas de enzima o ensayo
se puede combinar con sustancias
radioactivas Aunque estas técnicas estén
más en desuso en la actualidad o por
último se puede combinar con sustancias
fluorescentes y luego hacer una examina
un examen o bien al microscopio o bien
mediante aparatos eh fluorímetro o
citómetros que cuenten o que nos
permitan detectar la
fluorescencia pero a lo que íbamos en
esta píldora Cómo se pueden producir
estos anticuerpos en el laboratorio bien
para ello hay que inyectar en un animal
de laboratorio una suspensión de los
antígenos normalmente este animal eh va
a ser un ratón cuando vamos a obtener
anticuerpos monoclonales y va a ser un
conejo cuando se buscan anticuerpos
policlonales Aunque en el caso de los
policlonales se pueden utilizar otras
especies animales como son las cabras eh
Las ovejas Eh muchas otras pero sobre
todo insisto los conejos Pero lo primero
que tenemos que tener es una suspensión
del antígeno que se va a preparar y se
va a inyectar en la cavidad peritoneal
del animal en este ejemplo tenemos el
ratón y se va a dejar que se produzca
una respuesta inmunológica primaria
pasadas entre siete y 10 días tras esta
primera inmunización vamos a realizar
una segunda inmunización con la misma
sustancia con el mismo antígeno con esto
con lo que se busca es una respuesta
secundaria de memoria mucho más potente
y con mayor número de células en ese
momento se sangra al animal y se va a
poder analizar esa sangre para ver la
presencia en ella de anticuerpos aunque
ya en esta sangre Si separamos el suero
vamos a encontrar una mezcla de
anticuerpos dirigidos frente a los
distintos epítopos que tenía nuestro
antígeno el rojo el azul o el verde esos
serían anticuerpos policlonales Si
queremos llegar al monoclonal tenemos
que obtener el vazo del animal aquí
tendremos clones específicos de nuestro
antígeno de interés y clones
inespecíficos de nuestro antígeno como
son los
grises para buscar los que nos interesan
en primer lugar lo que hay que hacer es
eh fusionar las células B del animal Ob
tenidas del vazo con unas células
tumorales un mieloma aquí estáis viendo
cómo se está produciendo esta fusión y
estas células fusionadas se llaman
hibridomas tienen la capacidad de
recrecimiento permanente del tumor y la
capacidad del Linfocito B de generar
anticuerpos lo siguiente que habrá que
hacer es ver cuáles se han fusionado y
cuáles no Para ello se Pon medio en un
medio selectivo y como veis los
linfocitos t que no han fusionado no han
forma híbrido
acaban
muriendo el siguiente paso será ver cuál
de estas células eh B se ajusta al
antígeno que yo quiero estudiar para eso
hay que hacer una técnica que se llama
de dilución Límite en las que calculamos
que podemos sembrar en un pocillo una o
menos células B en este caso son
hibridomas pero con las características
de Linfocito B de producir anticuerpos y
tendremos algunos clones que producen
anticuerpos de interés y otros clones
que producen anticuerpos irrelevantes
para nuestro interés de investigación o
de diagnóstico bien pasados unos días en
un incubador en determinadas condiciones
estas células se replicarán y formarán
los llamados clones que sintetizar Ann
inmunoglobulinas como veis en los que no
había células no hay crecimiento Y no
habrá anticuerpos y ahora tenemos que
saber de estos seis ejemplos que tenemos
en el dibujo cual produce anticuerpos
frente a nuestro epítopo de interés o
cuál es
irrelevante hacemos réplicas de estas
placas y haremos finalmente
inmunoensayos enfrentándolos a nuestro
antígeno de interés para ver cuál
reacciona y cuál no con nuestro antígeno
y por lo tanto Cuál de estos clones es
un anticuerpo monoclonal interesante
para la técnica que estamos
diseñando bien hemos dispensado la placa
y ahora ponemos estos seis clones en
contacto con nuestro antígeno original y
vamos a ver cuál produce reacción O cuál
no produce reacción en los que no hay
ningún crecimiento por supuesto no se va
a producir ninguna reacción Pero dentro
de los que hay anticuerpos en algunos
habrá anticuerpos que reaccionan frente
a las partículas de nuestro antígeno y
en otros pocillos habrá anticuerpos que
no reaccionan pues bien en los que hay
reacción tendremos los anticuerpos
monoclonales que nos interesan que son
los que están marcados aquí como
reacción positiva en tanto que los que
han dado reacción negativa ya nos vamos
a seguir usando aquellos que dieron
reacción positiva vamos a hacer una
resiembra de estos eh hibridomas en gran
cantidad de líquido y esto lo metemos en
un incubador para obtener pues lo que se
aprecia en la imagen muchísimas células
B productoras de muchísima cantidad de
anticuerpo que sea el que podemos ya
utilizar para la técnica
alternativamente los hibridomas se
pueden
reinyector en líquido ascítico se puede
obtener una elevadísima concentración
del anticuerpo de interés como aparece
en esta imagen porque produce una
reacción en el animal y lo obtenemos
también en cantidades masivas así pues
dos maneras de obtenerlo en grandes
cantidades ahora el anticuerpo está
listo ya para las técnicas diagnósticas
Sí para algunas para otras tendrá que
ser conjugado con enzimas con sustancias
fluorescentes o con sustancias
radioactivas entre otras
de modo que en esta píldora hemos
repasado Cuáles son las técnicas de
inmunoensayo que se utilizan en el
diagnóstico Cuál es la metodología
básica para la producción de anticuerpos
policlonales y cuál es la metodología
básica para la producción de anticuerpos
monoclonales podrías preguntarte si
sabes las siguientes eh
cuestiones para técnicas de aglutinación
y precipitación es mejor usar
anticuerpos monoclonales o policlonales
Qué tipo de anticuerpos se pueden
utilizar para técnicas de
inmunofluorescencia En qué animales de
laboratorio se suelen producir los
anticuerpos
policlonales y en cuanto a esto En qué
animales se producen los monoclonales
Cuántas inmunizaciones son necesarias
para obtener anticuerpos los anticuerpos
monoclonales se obtienen directamente
del vazo del animal los anticuerpos
monoclonales obtenidos en animales
sirven directamente para todas las
técnicas sin más modificaciones Bueno si
lo sabes todo perfecto Vete ya a
estudiar las técnicas pero si no lo
sabes dale un repaso y nos vemos en la
próxima Hasta
[Música]
pronto
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