Técnica ELISA [Teoría y Práctica]

Nutrimente

15 Aug 202210:52

Summary

TLDREl video de hoy presenta la técnica ELISA, una herramienta esencial en la biología y medicina para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas. Se explica cómo se realiza un ensayo indirecto y un ensayo 'sandwich' para maximizar la sensibilidad. Además, se muestra el proceso práctico paso a paso, desde la absorción del antígeno hasta el bloqueo, la reacción antígeno-anticuerpo y la amplificación con conjugados enzimáticos. Los controles negativos, positivos y de lectura son fundamentales para validar los resultados. El video también destaca la importancia de la optimización y el uso de kits listos para el diagnóstico de enfermedades específicas.

Takeaways

🔬 Los ensayos ELISA son utilizados para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas.
🔍 La técnica ELISA se conoce por las siglas EIA, que significa 'ensayo inmuno enzimático'.
📍 El proceso básico del ensayo incluye la adsorción del antígeno en una superficie sólida, la unión de anticuerpos específicos y la revelación de la reacción mediante una enzima.
📈 La densidad óptica medida en el ensayo es proporcional a la cantidad del complejo antígeno-anticuerpo formado.
🔑 El ensayo indirecto aumenta la sensibilidad del método mediante la reacción de anticuerpos específicos con un segundo anticuerpo anti-especie conjugado a una enzima.
🏥 Los ensayos ELISA se usan en el diagnóstico de enfermedades infecciosas, como la detección de anticuerpos anti-VIH en el plasma sanguíneo.
🧪 La técnica 'sandwich' de ELISA permite detectar la presencia de un antígeno específico, como una proteína, mediante la captura y la reacción con anticuerpos adicionales.
🤰 Se utiliza el ensayo 'sandwich' para el diagnóstico del embarazo, detectando la hormona gonadotropina coriónica humana en orina o sangre.
🦠 Los ensayos ELISA también son útiles para el diagnóstico de la COVID-19, identificando antígenos específicos del virus en muestras de sangre o saliva.
🏠 Existen versiones caseras de los ensayos ELISA, lo que permite su uso en entornos no laboratoriales.
🛠️ Es importante optimizar cada paso del ensayo ELISA, ya que implica múltiples variables y es necesario adaptar el protocolo a los requisitos específicos de cada caso.

Q & A

¿Qué técnica se discute en el video de hoy?
-El video de hoy discute la técnica ELISA (Ensayo de Inmunoenzima Asociado), una técnica utilizada para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas.
¿Cuál es el propósito de los ensayos ELISA?
-Los ensayos ELISA están diseñados para detectar y cuantificar sustancias específicas en una muestra, como anticuerpos, antígenos y hormonas.
¿Qué es el ensayo indirecto en ELISA y cómo aumenta la sensibilidad del método?
-El ensayo indirecto es una técnica en la que los anticuerpos específicos unidos al antígeno reaccionan con un segundo anticuerpo antiespecie, lo que produce una amplificación del primer complejo inmune y, al estar conjugado a una enzima, da lugar a una mayor sensibilidad en la detección.
¿Cómo se utiliza la técnica ELISA en el diagnóstico de enfermedades infecciosas?
-La técnica ELISA se utiliza para el diagnóstico de enfermedades infecciosas a través de la detección de anticuerpos específicos que nuestro cuerpo produce para combatir las infecciones, como en el caso de la detección del VIH.
¿Qué es el ensayo 'sandwich' en ELISA y para qué se utiliza?
-El ensayo 'sandwich' es una técnica de ELISA utilizada para detectar la presencia de un antígeno específico. Se emplean dos tipos de anticuerpos, donde el primero captura el antígeno y el segundo se une a este, formando un complejo que permite la detección.
¿En qué consiste el proceso de 'coating' en un ensayo ELISA y cómo se realiza?
-El 'coating' es el proceso de absorción del antígeno en la fase sólida, generalmente en la superficie de un pocillo de una placa. Se incuba una solución con exceso de antígeno y luego se descarta el líquido, secando la superficie con papel absorbente.
¿Qué es el 'bloqueo' en un ensayo ELISA y cuál es su propósito?
-El 'bloqueo' es el proceso de agregar una proteína irrelevante para ocupar las zonas no cubiertas por antígeno en la fase sólida, evitando así la interacción no específica de los anticuerpos con el material de la placa.
¿Qué sucede durante la reacción antígeno-anticuerpo en un ensayo ELISA y cómo se lleva a cabo?
-Durante la reacción antígeno-anticuerpo, la muestra se pone en contacto con el antígeno absorbido en la superficie sólida. Los anticuerpos específicos, si están presentes, se unen al antígeno. Después de incubar y lavar, se separan los anticuerpos no unidos del complejo antígeno-anticuerpo.
¿Cómo se realiza la amplificación en un ensayo ELISA y qué se utiliza para ello?
-La amplificación se realiza mediante la reacción de un anticuerpo antiespecie conjugado con una enzima, como la peroxidasa, que reacciona con los anticuerpos unidos al antígeno. Esto permite la detección del complejo formado a través de la conversión de un sustrato en un producto coloreado.
¿Qué son los controles y cómo son importantes en un ensayo ELISA?
-Los controles son muestras que se utilizan para validar el proceso del ensayo ELISA. Incluyen controles negativos, positivos y blancos de lectura, que ayudan a determinar si la técnica está funcionando correctamente y a establecer puntos de corte para la interpretación de los resultados.
¿Cómo se pueden utilizar los kits de ELISA listos para el diagnóstico de enfermedades específicas?
-Los kits de ELISA listos para el diagnóstico de enfermedades específicas son preparados para facilitar la detección de marcadores biológicos asociados a ciertas enfermedades, permitiendo a los investigadores y médicos realizar análisis más rápidos y precisos.

Outlines

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🔬 Introducción a la técnica ELISA

En este párrafo se presenta la técnica ELISA, destacando su uso para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas. Se explica que ELISA se basa en la unión de un antígeno a una fase sólida, y la detección de la reacción antígeno-anticuerpo mediante la adición de un anticuerpo conjugado con una enzima que produce un cambio de color. Además, se mencionan los ensayos indirectos y directos, así como sus aplicaciones en el diagnóstico de enfermedades infecciosas, como la detección del VIH y la COVID-19.

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🧪 Procedimiento del ensayo ELISA

Este párrafo describe en detalle el procedimiento de un ensayo ELISA, comenzando con la absorción del antígeno en la fase sólida de una placa. Luego, se cubren pasos como el bloqueo para evitar interacciones no específicas, la reacción entre el antígeno y los anticuerpos, la amplificación del señal mediante un anticuerpo conjugado con una enzima, y finalmente, la medición de la densidad óptica del producto coloreado en un espectrofotómetro. También se discute la importancia de incluir controles negativos y positivos para asegurar la precisión del ensayo.

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📦 Kits comerciales y conclusión

En este último párrafo, se menciona la disponibilidad de kits comerciales para la realización de ensayos ELISA, diseñados específicamente para la investigación y el diagnóstico de diversas enfermedades. El párrafo concluye con una invitación a los espectadores a darle 'like' al video, compartirlo, suscribirse al canal, y apoyar al creador en Patreon para acceder a contenido exclusivo y otros beneficios.

Mindmap

Keywords

💡ELISA

ELISA, o Ensayo de Inmunoenzima, es una técnica utilizada para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas en una muestra. Es central en el video, ya que se describe su teoría y práctica para el diagnóstico de enfermedades y la detección de sustancias específicas.

💡Antígeno

Un antígeno es cualquier sustancia que induce una respuesta inmunitaria en el cuerpo, como una proteína o un patógeno. En el contexto del ELISA, los antígenos son las sustancias que se fija en la fase sólida para ser detectadas por anticuerpos específicos.

💡Anticuerpo

Los anticuerpos son proteínas producidas por el sistema inmunitario para identificar y neutralizar sustancias extranjeras. En el ELISA, los anticuerpos específicos se utilizan para detectar la presencia de un antígeno o para amplificar la señal en la reacción inmunitaria.

💡Sustrato

El sustrato es una molécula incolora que se transforma por una enzima en un producto coloreado durante el proceso de revelado en un ELISA. Este cambio de color es medible y proporcional a la cantidad de complejo antígeno-anticuerpo formado.

💡Conjugado

Un conjugado es una molécula que ha sido combinada con otra, en este caso, un anticuerpo conjugado con una enzima. Este conjugado es crucial para la detección del complejo antígeno-anticuerpo, ya que la enzima actúa sobre el sustrato para producir una señal visible.

💡Amplificación

La amplificación en un ELISA se refiere al proceso de aumentar la señal para obtener una mayor sensibilidad en la detección. Se logra mediante la adición de un segundo anticuerpo o mediante la reacción del conjugado con el sustrato.

💡Diagnóstico

El diagnóstico es el proceso de识别 o confirmación de una enfermedad o condición médica. En el video, el ELISA se utiliza para el diagnóstico de enfermedades infecciosas y otras condiciones, como la detección de anticuerpos contra el VIH o la presencia de hormonas en el embarazo.

💡Sandwich ELISA

La Sandwich ELISA es una variación del método que permite la detección de antígenos específicos. En el script, se describe cómo los anticuerpos específicos capturan el antígeno y luego se amplía la señal con un segundo anticuerpo conjugado a una enzima.

💡Coating

El coating es el proceso de fijar el antígeno en la fase sólida, generalmente en los pocillos de una placa. Es el primer paso en la técnica ELISA y es crucial para la adhesión de los antígenos y la posterior detección por anticuerpos.

💡Bloqueo

El bloqueo es el paso en el ELISA donde se utiliza una proteína irrelevante para ocupar áreas no cubiertas por antígenos en la placa. Esto evita falsos positivos al evitar que los anticuerpos interactúen con el material de la placa.

💡Controles

Los controles son muestras estándar que se utilizan en un ELISA para validar el procedimiento y asegurar la precisión de los resultados. En el video, se mencionan controles negativos, positivos y blancos de lectura como parte integral del análisis.

Highlights

El vídeo explica la técnica ELISA, una herramienta utilizada para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas.

Los ensayos ELISA son conocidos por su sigla en inglés 'Enzyme-Linked Immunosorbent Assay'.

Se describen los principios básicos del ensayo ELISA, incluyendo la adsorción del antígeno en una fase sólida y la reacción con anticuerpos específicos.

Se menciona la técnica de 'sandwich ELISA' para la detección de antígenos específicos como proteínas.

La técnica indirecta de ELISA se utiliza para aumentar la sensibilidad del método mediante la reacción con un segundo anticuerpo antiespecie.

Se explica cómo se realiza una reacción directa en ELISA, donde un anticuerpo específico se conjuga con una enzima para revelar la presencia de un antígeno.

Los ensayos ELISA son utilizados en el diagnóstico de enfermedades infecciosas a través de la detección de anticuerpos en muestras sanguíneas.

Se destaca la detección del VIH como un ejemplo de aplicación de los ensayos ELISA en diagnósticos médicos.

Se menciona la técnica de 'sandwich ELISA' para el diagnóstico de embarazo, detectando la presencia de la hormona gonadotropina coriónica humana.

Los ensayos ELISA también se utilizan para el diagnóstico de la COVID-19, detectando antígenos del virus en muestras de sangre o saliva.

Existen versiones caseras de los ensayos ELISA, lo que permite su realización fuera de un laboratorio.

Se abordan los pasos del procedimiento ELISA, desde la coación del antígeno hasta el bloqueo, la reacción antígeno-anticuerpo y la amplificación con conjugados enzimas.

Se describe el uso de leche en polvo descremada para el bloqueo de la placa en el procedimiento ELISA.

Se explican los controles necesarios en un ensayo ELISA, como los controles negativos, positivos y los blancos de lectura para la evaluación de la técnica.

Se menciona la importancia de la optimización de cada paso en el ensayo ELISA para adaptarse a los requisitos específicos de la investigación o diagnóstico.

Se describe el análisis cualitativo y cuantitativo de los resultados de un ensayo ELISA, incluyendo la interpretación de la coloración y la construcción de curvas de dilución.

Existen kits de ELISA de lista comerciales, preparados específicamente para la investigación y el diagnóstico de enfermedades determinadas.

El vídeo invita a los espectadores a dar like, compartir y suscribirse al canal para recibir más información sobre técnicas y diagnósticos médicos.