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Biotech Basics

7 May 202212:35

Summary

TLDREl video ofrece una explicación detallada de los procedimientos de aislamiento de colágeno, que incluyen preparación de la muestra, extracción, purificación y reorganización de la molécula de colágeno. Se discuten métodos como la precipitación con sales, extracción ácida y el método enzimático, destacando la importancia de la dialisis y la cromatografía de intercambio cationico para purificar el colágeno. Además, se menciona la reconstrucción de la estructura fibrosa del colágeno para restaurar su integridad después de los procesos de extracción.

Takeaways

🔬 Hay cuatro pasos principales en el procedimiento de aislamiento de colágeno: preparación de la muestra, extracción de colágeno, purificación y reformación de la molécula de colágeno.
🐂 Las tendones son una fuente preferida para el aislamiento de colágeno, ya que son ricas en este.
❄️ Se refrigeran las tendones en agua destilada a 4°C durante tres días para minimizar la contaminación no deseada.
💧 El agua en la que se sumergen las tendones se cambia dos veces al día para mantener la pureza del colágeno.
🔪 Después de la preparación, las fibras de colágeno se cortan en trozos pequeños y se pulverizan para facilitar la extracción.
🧂 El método de precipitación con sales es una técnica común para extraer colágeno, donde se utiliza una solución salina para inducir la autoensamblaje de las moléculas de colágeno.
🧬 La diálisis es un paso importante en la purificación del colágeno, permitiendo la eliminación de otros componentes no deseados.
🌡️ El método de extracción ácida involucra sumergir las tendones en una solución ácida para solubilizar el colágeno, con EDTA como agente antibacteriano.
🧪 El método enzimático de aislamiento de colágeno utiliza pepsina para digestión selectiva, ayudando a purificar el colágeno de otras proteínas.
🧬 La cromatografía de intercambio cationico es una técnica de purificación adicional que utiliza la carga eléctrica para separar el colágeno de otras proteínas.
🔄 La reconstrucción del colágeno es un paso final que ayuda a restaurar la estructura original del colágeno después de los procesos de extracción y purificación.

Q & A

¿Cuáles son los cuatro pasos principales en el procedimiento de aislamiento de colágeno?
-Los cuatro pasos principales en el aislamiento de colágeno son: preparación de la muestra, extracción de colágeno de la muestra, purificación de colágeno de otras proteínas no colágenas y reorganización de la molécula de colágeno.
¿Por qué se prefieren los tendones como fuente para la extracción de colágeno?
-Los tendones son preferidos como fuente de colágeno porque son ricas en este y son más accesibles para su extracción.
¿Cómo se realiza la preparación de la muestra de colágeno?
-La preparación de la muestra de colágeno implica suspender los tendones en agua destilada fría a 4 grados Celsius durante tres días, cambiar el agua dos veces al día, descongelar y lavar los tendones con agua fría, cortar los fibras colágenas en trozos pequeños y pulverizarlos, y luego secarlos durante 24 horas a 40-45 grados Celsius.
¿Qué son los tres métodos importantes para la extracción de colágeno?
-Los tres métodos importantes para la extracción de colágeno son el método de precipitación con sales, el método de extracción ácida y el método enzimático.
¿Cómo funciona el método de precipitación con sales para extraer colágeno?
-El método de precipitación con sales implica aumentar la concentración de sales en la solución para que los colágenos, que son lipófilos, se autoensamblen y se precipiten, rodeados por una capa de agua y sales.
¿Qué es la diálisis y cómo se utiliza en la purificación del colágeno?
-La diálisis es un proceso que utiliza una membrana permeable para separar sustancias disueltas en un líquido. En la purificación del colágeno, se utiliza para eliminar proteínas no deseadas y otros contaminantes, dejando aisladas las proteínas colágenas.
¿Cuál es el propósito de utilizar ADTA en el método de extracción ácida de colágeno?
-El ADTA se utiliza en el método de extracción ácida como agente antibacteriano para evitar el crecimiento de biofilms y como agente de complexación para evitar la presencia de cations divalentes.
¿Qué es el método enzimático de extracción de colágeno y cómo funciona?
-El método enzimático de extracción de colágeno implica tratar los tendones con acetato de sodio y luego agregar pepsina para realizar la digestión enzimática. Esto ayuda a solubilizar las fibras colágenas y a remover las proteínas no deseadas.
¿Qué es la cromatografía de intercambio cationico y cómo se utiliza en la purificación del colágeno?
-La cromatografía de intercambio cationico es un método que utiliza colunas con partículas cargadas negativamente para atraer aminoácidos con carga positiva, permitiendo separar proteínas colágenas positivamente cargadas de otras proteínas no deseadas.
¿Por qué es necesario realizar la reconstrucción de la molécula de colágeno después de la extracción?
-La reconstrucción de la molécula de colágeno es necesaria porque las fibras colágenas pueden estar dañadas o desorganizadas después de los procesos de extracción. Este paso ayuda a restaurar la estructura original del colágeno.