Extracción de ADN por kit comercial
Summary
TLDREste vídeo educativo detalla el proceso de extracción de ADN a partir de sangre utilizando un kit comercial. Cubre la preparación de superficies y equipos con etanol al 70%, el uso de guantes para evitar contaminación, y la homogeneización de la sangre. Seguidamente, se describe la adición de proteína saca y buffer, incubación a 56 grados Celsius, y los pasos de centrifugación y lavado. El ADN se concentra y se verifica su integridad mediante espectrofotometría y electroforesis en gel de ágarosa. El vídeo también menciona técnicas de limpieza del ADN.
Takeaways
- 🧬 La extracción de ADN se realiza a partir de muestras biológicas, en este caso, sangre, utilizando un kit comercial de renombre.
- 🔬 Se debe tener en cuenta la importancia de la preparación de superficies y equipos con etanol al 70% o agua con cloro al 10% para evitar la contaminación.
- 🧤 El uso de guantes es esencial para prevenir la contaminación de muestras por parte de las manos.
- 📚 Es fundamental seguir el manual de instrucciones del kit para asegurar el éxito de la extracción de ADN.
- 🌡️ Se requiere un bloque de calentamiento para incubar las muestras a 56 grados Celsius durante 10 minutos.
- 🧪 La homogeneización de la sangre es crucial para obtener una muestra representativa, lo que se logra mediante la inversión del tubo varias veces.
- 🧪 Se utiliza una proteína saca para facilitar la extracción del ADN, agregándola a los tubos con sangre y homogeneizando la mezcla.
- 🌀 La centrifugación es un paso clave para separar los componentes de la muestra, utilizando diferentes velocidades y tiempos según el protocolo.
- 📝 La identificación de la ubicación del ADN en la columna de filtrado es crucial para su recuperación eficiente.
- 🔎 La integridad y pureza del ADN se evalúan mediante espectrofotometría y electroforesis en gel de ágarosa para garantizar la calidad del material genético obtenido.
Q & A
¿Qué material biológico se utiliza para la extracción de ADN en el vídeo?
-Se utiliza sangre como material biológico para la extracción de ADN.
¿Por qué es importante limpiar las superficies y equipos antes de la extracción de ADN?
-Es importante limpiar las superficies y equipos para evitar la contaminación con microorganismos y otros contaminantes que podrían afectar el resultado de la extracción de ADN.
¿Cuál es el propósito de usar guantes durante la extracción de ADN?
-Los guantes se utilizan para evitar que las sales y aceites de la piel de las manos contaminen la muestra y afecten el resultado de la extracción.
¿Qué es la 'proteína saca' y cómo se utiliza en el proceso?
-La 'proteína saca' es un componente del kit de extracción de ADN que se utiliza para ayudar a solubilizar las células sanguíneas. Se agita en un bol para homogeneizarla y luego se agrega a los tubos con la sangre.
¿Cuál es el rol del buffer en el proceso de extracción de ADN?
-El buffer se utiliza para equilibrar las condiciones químicas y ayudar en la extracción y purificación del ADN de la sangre.
¿Qué temperatura y duración se utilizan para la incubación de las muestras durante el proceso?
-Las muestras se incuban a 56 grados Celsius durante 10 minutos.
¿Qué es una 'mini columna' y cómo se utiliza en la extracción de ADN?
-Una 'mini columna' es un componente del kit que se utiliza para la centrifugación y purificación del ADN. Se llena con la muestra incubada y luego se centrifuga para separar el ADN de otros componentes.
¿Cómo se verifica la integridad y pureza del ADN una vez extraído?
-La integridad y pureza del ADN se verifican utilizando un espectrofotometro, como el nano, para medir la concentración y la relación 260/280, y también mediante electroforesis en gel de ágarosa para visualizar la integridad del ADN.
¿Qué es el 'buffer a w1' y para qué se utiliza en el proceso?
-El 'buffer a w1' es un componente del kit de extracción de ADN que se utiliza para lavado y purificación del ADN durante el proceso de centrifugación.
¿Cuál es el propósito de secar la muestra después de la centrifugación final?
-El propósito de secar la muestra es eliminar cualquier residuo de líquido que pueda interferir con la concentración y pureza del ADN, facilitando así una mejor evaluación de la calidad del ADN.
Outlines
🧬 Preparación para la extracción de ADN de sangre
Este primer párrafo del guion del video explica cómo se realiza la extracción de ADN a partir de sangre utilizando un kit comercial. Se menciona la importancia de contar con un técnico especializado para obtener la muestra de sangre y se enfatiza en la preparación de superficies y equipos con etanol al 70% o agua con cloro al 10% para evitar la contaminación. Se detalla el uso de guantes para prevenir la transferencia de contaminantes de las manos. Además, se describe el proceso de preparación del kit, incluyendo la lectura del manual de instrucciones, la preparación de la centrífuga y el baño termico. Se indica cómo se mezcla la sangre para obtener una muestra homogénea y cómo se agrega la proteína saca y el buffer a los tubos de muestra. Finalmente, se menciona la incubación de las muestras a 56 grados Celsius durante 10 minutos.
🔬 Proceso de extracción y purificación del ADN
El segundo párrafo describe el procedimiento detallado para extraer y purificar el ADN de la sangre. Incluye la adición de etanol absoluto a las muestras y su posterior centrifugación. Se explica cómo se preparan las mini columnas incluidas en el kit y cómo se transfieren las muestras a estas columnas. Se menciona la importancia de seguir las instrucciones del manual del kit para identificar la ubicación del ADN en la columna. Se describen los pasos de lavado con diferentes buffers y las centrifugaciones correspondientes. Además, se detalla cómo se seca la muestra para eliminar cualquier líquido residual y cómo se prepara el ADN para su evaluación final, incluyendo la adición de un pastel y su incubación, y la centrifugación para que el líquido pase a través de la columna.
🧐 Verificación de integridad y pureza del ADN
El tercer párrafo se centra en la verificación de la integridad y pureza del ADN extraído. Se describe el uso de un espectrofotometro para medir la concentración y pureza del ADN, y se mencionan las lecturas obtenidas. Además, se explica el proceso de electroforesis en gel de ágarosa para evaluar la integridad del ADN, incluyendo la preparación del tampón y la carga del gel. Se detalla cómo se visualizan las bandas en el gel y cómo se interpreta la presencia de ADN y otros materiales genéticos. Finalmente, se sugiere la investigación de técnicas adicionales para la limpieza del ADN.
Mindmap
Keywords
💡Extracción de ADN
💡Kit comercial
💡Sangre
💡Etanol al 70%
💡Guantes
💡Centrífuga
💡Baño termico
💡Proteína saca
💡Buffer
💡Electroforesis
💡Nanoespectrofotometro
Highlights
Extracción de ADN a partir de sangre usando un kit comercial.
Importancia de tener técnicas de manejo adecuado para evitar la contaminación de muestras.
Limpieza de superficies y equipos con etanol al 70% o agua con cloro al 10% para prevenir la contaminación microbiana.
Uso de guantes para evitar que las manos, fuente de contaminantes, afecten los resultados.
Preparación de los kits de extracción siguiendo protocolos escritos.
Calentamiento del bloque para la incubación antes de comenzar el proceso.
Lectura cuidadosa del manual de instrucciones del kit para asegurar el éxito del proceso.
Homogeneización de la sangre mediante inversión para obtener una muestra representativa.
Uso de la proteína saca para ayudar en la extracción del ADN.
Agregación de sangre y buffer en tubos para iniciar la extracción.
Incubación de las muestras a 56 grados Celsius para facilitar la liberación del ADN.
Uso de etanol absoluto para precipitar el ADN en la muestra.
Centrifugación para separar el ADN del resto de las células y sucesos.
Uso de mini columnas para la purificación del ADN.
Lavado de las mini columnas con buffer para remover impurezas.
Secado de las muestras para eliminar cualquier residuo de líquido.
Verificación de la integridad y pureza del ADN mediante espectrofotometría.
Uso de gel de electroforesis para evaluar la integridad del ADN y su pureza.
Interpretación de las mediciones de absorbancia para determinar la calidad del ADN.
Proceso de limpieza del ADN para su uso en futuras aplicaciones.
Transcripts
hola y bienvenidos a este vídeo
explicatorio donde vamos a hacer una
extracción de adn a partir de material
biológico que va a ser sangre por lo
tanto va a ser una buena técnica de
entrenamiento para que vayamos viendo y
comprendiendo todas las habilidades que
debemos obtener lo primero que les voy a
mencionar es que vamos a hacer la
extracción de adn a partir de un kit
comercial muy conocido y muy prestigioso
en ese sentido cuando nosotros queremos
hacer una extracción de adn de material
biológico que en este caso es sangre
debemos tener presente que nosotros no
podemos extraer sangre a persona por eso
necesitamos un algún técnico
especializado en eso y de esta forma
tener la muestra ahora antes de comenzar
debemos preparar nuestras superficies
sabemos que tenemos microorganismos
presentes por lo mismo debemos limpiar
las pipetas del equipamiento y nuestro
mesón con etanol al 70%
en otro caso puede ser con agua con
cloro al 10% también el uso de guantes
es muy importante ya que nuestra mano
también tenemos contaminantes pueden
afectar el resultado de nuestra
experiencia
cada kit trae estos va a ser que debemos
prepararlos las condiciones salen
escritas en los protocolos una vez que
preparamos eso estamos casi listos para
comenzar preparamos nuestras centrífugas
y preparamos el baño termo regulado que
lo vamos a utilizar en este caso un
bloque debemos encenderlo antes de
comenzar nuestro trabajo debido a que el
bloque debe calentarse y debemos
asegurarnos también de leer muy bien el
manual de instrucciones del kit una vez
que tenemos todo eso listo vamos a
comenzar a trabajar tomamos
tubos de 15 micro tubos de 15 y los
rotulados con la muestra que nosotros
vamos a trabajar para no tener
confusiones más adelante mezclamos la
sangre y eso vamos a hacerlo mediante la
inversión diez veces más para
asegurarnos de tener una muestra
homogénea y si nos damos cuenta lo
primero que vamos a tomar va a ser la
proteína saca que la vamos a agitar en
un bol texas para asegurarnos de que
quede bien homogenizada y luego le vamos
a dar un spin agregamos 20 microlitros
de la proteína saca a cada tubo que
vamos donde vamos a colocar nuestras
muestras
y
[Música]
vamos a tomar 200 microlitros de la
sangre y vamos a colocarlas en cada tubo
lo vamos a hacer de manera lenta ya que
la sangre es viscosa
y luego de que hacemos esto tapamos los
tubitos y agregamos 200 microlitros de
buffer a cada muestra el buffer a él es
el primer papel que vamos a utilizar
entonces con cuidado tomamos el buffer
lo agregamos en nuestra muestra y
mezclamos la muestra con portis
ahora estas muestras las vamos a colocar
en nuestro año tenemos regulado nuestro
bloque y lo vamos a dejar a 56 grados
celsius y los vamos a dejar incubando
durante 10 minutos
al final del periodo de incubación vamos
a retirar las muestras del calefactor
y vamos a sentar y fugar previamente
para eliminar las gotas que hayan estado
en la tapa luego de esto agregamos 200
microlitros de etanol absoluto a cada
micro tubo y mezclamos nuevamente con
vortex durante unos 15 segundos y
hacemos un split por unos 15 segundos
para el acto al ser fondo ahora vamos a
preparar las mini columnas que vienen
incluidas en el kit de centrifugado para
cada muestra vamos a etiquetar las mini
columnas de centrifugado con el nombre o
la identidad de cada una de nuestras
muestras para evitar cualquier tipo de
confusión tenemos que tener mucho
cuidado en este paso al transferir
nuestra muestra desde los tubos que
fueron incubados hacia la mini columna
asegurándonos de que cada columna tenga
la identidad
es necesario vamos a agregar todo el
concentrado que estuvimos incubando
dentro de estas mini columnas y de esta
manera vamos a desechar los tubos
antigua esto lo vamos a colocar en la
centrífuga y lo vamos a sentir jugar a
servir g que son 8.000 revoluciones por
minuto durante un minuto luego de esto
tenemos todo el precipitado que cayó al
tubo colector
aquí tiene otro paso crucial tenemos que
saber dónde está la dne en este caso el
kit o el manual nos va a decir dónde
quedará en este caso queda en la columna
ahora el siguiente paso va a ser
agregar a la columna 500 microlitros de
buffer a w 1 que van a hacer los pasos
de lavado
con cuidado de no mojar ningún lugar en
recordar también que la punta debemos
cambiarla cada vez que utilizamos un
algún reactivo porque podemos contaminar
lo luego de eso pasamos nuevamente a
centrifugar por seis bilge durante un
minuto
y nuevamente tomamos nuestros todos
vamos a tener un líquido que pasó el
tubo colector y lo que debemos hacer
ahora es cambiar nuevamente el tubo
colector y pasarlo a un tubo colector
limpio y descartamos los tubos usados
solamente dejamos la columna ahora
agregamos nuevamente el buffer wv2 son
500 microlitros lo agregamos a la
columna con mucho cuidado teniendo
también el recuerdo de botar las puntas
que van utilizando y nuevamente vamos
atento y jugar en este caso vamos
centrifugar a 20.000 g durante tres
minutos bueno vamos a obtener muy
poquito líquido que pasó por la columna
de centrifugado ese líquido lo vamos a
votar y vamos a aprovechar esta columna
no estuvo colector para poder utilizarlo
dentro de la columna para eso lo vamos a
acercar con una toalla de papel
tratando de sacar el máximo de líquido
kicker ahora lo que vamos a hacer es
secar la muestra para eso vamos a
centrifugar a 20.000 g a máxima
velocidad durante tres minutos eso va a
suponer que nuestra muestra va a
encontrarse libre de cualquier tipo de
líquido ya sea tan sólo algún otro
residuo que esté presente
bueno después de esto vamos a cambiar
nuestras columnas o nuestros columnas de
filtrado las vamos a cambiar a tubos de
15 minutos de 1,5 y vamos a agregar un
pastel de 200 microlitros a cada tubo
bueno eso lo vamos a repetir con cada
una de nuestras muestras y vamos a dejar
incubando estas muestras durante un
minuto posteriormente a esto vamos a
pasar una centrífuga a 6000 g por un
minuto y nos vamos a dar cuenta que el
líquido pasó a través de la columna
ahora si ya tenemos nuestro ven pero
para extraer o maximizar la mayor
cantidad de dni que ya quedaba en la
columna vamos a repetir el paso 1 minuto
de incubación nuevamente 6000 g de
centrifugación durante 1 minuto y ya se
supone que tendríamos la mayor cantidad
de adn recolectado en este va ser de
ilusión se le denomina bastante ilusión
que puede ser algún compuesto específico
o agua destilada el siguiente paso que
vamos a realizar es vamos a verificar la
integridad del adn y vamos a identificar
la pureza de nuestro material genético
para esto vamos a utilizar mismo tubos
de 0.2 y vamos a sacar aproximadamente 5
microlitros
el concentrado que obtuvimos de cada
muestra y los vamos a pasar a través de
un espectrofotómetro que en este caso se
denomina nano creo que determina la
concentración o la pureza del adn y otra
forma es utilizar un gel de
electroforesis en donde vamos a evaluar
la integridad del adn ahora primero como
vemos el nano lo vamos a tomar 1.5
microlitros de el buffer de ilusión o el
bayern
que está presente en el kit para hacer
un blanco luego que hacemos el blanco
vamos a medir las muestras para eso
primero vamos a hacer un sprint para que
la muestra que en el fondo del tubo y
vamos a agregar también 1.5 microlitros
de la muestra al número que íbamos a
obtener ciertas mediciones
en este caso las mediciones obtenidas
son 182 mil gramos por microlitro
posteriormente vamos a repetir lo mismo
con todas las muestras ahora si
observamos un poco los resultados me
gustaría que ustedes también
investigaron un poco sobre esto la
relación 260 282 60 230 en donde vamos a
poder observar realmente la calidad del
adn que pudimos extraer bueno lo
siguiente que vamos a hacer va a ser
evaluar la integridad del adn para esto
vamos a preparar un tampón un buffer
tampón el cual lo vamos a mezclar con el
adn y vamos a generar un buffer que
vamos a colocar dentro del gel de ácaros
a esta mezcla nos va a permitir poder
visualizar el adn tenemos también un
buffer thai que se coloca en la cubeta
de electroforesis y preparamos un gel de
ácaros al 1% y en este caso colocamos
las muestras dentro de este gel de
agarosa
esto se carga durante 30 minutos
aproximadamente a 100 volts y
posteriormente a esto podemos visualizar
este gel de agarosa mediante un trasto
nominador y en este caso podemos ver
bandas las bandas que se ven en los
costados son un marcador de peso
molecular y las patitas que se ven más
claras son presencia de adn en este caso
también podemos observar ciertas cosas
que son fundamentales si es que existe
presencia de adn o el adn está
desintegrado o que existe presencia de
otro material genético ya sea como el
arn bueno posterior a esto si existe
algún tipo de presencia que también me
gustaría que lo investigaran vamos a
generar algún
el proceso de limpieza de la d para
hacer limpieza del adn podemos utilizar
varias técnicas que también las vamos a
mencionar más adelante
[Música]
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