Técnica ELISA [Teoría y Práctica]
Summary
TLDREl video de hoy presenta la técnica ELISA, una herramienta esencial en la biología y medicina para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas. Se explica cómo se realiza un ensayo indirecto y un ensayo 'sandwich' para maximizar la sensibilidad. Además, se muestra el proceso práctico paso a paso, desde la absorción del antígeno hasta el bloqueo, la reacción antígeno-anticuerpo y la amplificación con conjugados enzimáticos. Los controles negativos, positivos y de lectura son fundamentales para validar los resultados. El video también destaca la importancia de la optimización y el uso de kits listos para el diagnóstico de enfermedades específicas.
Takeaways
- 🔬 Los ensayos ELISA son utilizados para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas.
- 🔍 La técnica ELISA se conoce por las siglas EIA, que significa 'ensayo inmuno enzimático'.
- 📍 El proceso básico del ensayo incluye la adsorción del antígeno en una superficie sólida, la unión de anticuerpos específicos y la revelación de la reacción mediante una enzima.
- 📈 La densidad óptica medida en el ensayo es proporcional a la cantidad del complejo antígeno-anticuerpo formado.
- 🔑 El ensayo indirecto aumenta la sensibilidad del método mediante la reacción de anticuerpos específicos con un segundo anticuerpo anti-especie conjugado a una enzima.
- 🏥 Los ensayos ELISA se usan en el diagnóstico de enfermedades infecciosas, como la detección de anticuerpos anti-VIH en el plasma sanguíneo.
- 🧪 La técnica 'sandwich' de ELISA permite detectar la presencia de un antígeno específico, como una proteína, mediante la captura y la reacción con anticuerpos adicionales.
- 🤰 Se utiliza el ensayo 'sandwich' para el diagnóstico del embarazo, detectando la hormona gonadotropina coriónica humana en orina o sangre.
- 🦠 Los ensayos ELISA también son útiles para el diagnóstico de la COVID-19, identificando antígenos específicos del virus en muestras de sangre o saliva.
- 🏠 Existen versiones caseras de los ensayos ELISA, lo que permite su uso en entornos no laboratoriales.
- 🛠️ Es importante optimizar cada paso del ensayo ELISA, ya que implica múltiples variables y es necesario adaptar el protocolo a los requisitos específicos de cada caso.
Q & A
¿Qué técnica se discute en el video de hoy?
-El video de hoy discute la técnica ELISA (Ensayo de Inmunoenzima Asociado), una técnica utilizada para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas.
¿Cuál es el propósito de los ensayos ELISA?
-Los ensayos ELISA están diseñados para detectar y cuantificar sustancias específicas en una muestra, como anticuerpos, antígenos y hormonas.
¿Qué es el ensayo indirecto en ELISA y cómo aumenta la sensibilidad del método?
-El ensayo indirecto es una técnica en la que los anticuerpos específicos unidos al antígeno reaccionan con un segundo anticuerpo antiespecie, lo que produce una amplificación del primer complejo inmune y, al estar conjugado a una enzima, da lugar a una mayor sensibilidad en la detección.
¿Cómo se utiliza la técnica ELISA en el diagnóstico de enfermedades infecciosas?
-La técnica ELISA se utiliza para el diagnóstico de enfermedades infecciosas a través de la detección de anticuerpos específicos que nuestro cuerpo produce para combatir las infecciones, como en el caso de la detección del VIH.
¿Qué es el ensayo 'sandwich' en ELISA y para qué se utiliza?
-El ensayo 'sandwich' es una técnica de ELISA utilizada para detectar la presencia de un antígeno específico. Se emplean dos tipos de anticuerpos, donde el primero captura el antígeno y el segundo se une a este, formando un complejo que permite la detección.
¿En qué consiste el proceso de 'coating' en un ensayo ELISA y cómo se realiza?
-El 'coating' es el proceso de absorción del antígeno en la fase sólida, generalmente en la superficie de un pocillo de una placa. Se incuba una solución con exceso de antígeno y luego se descarta el líquido, secando la superficie con papel absorbente.
¿Qué es el 'bloqueo' en un ensayo ELISA y cuál es su propósito?
-El 'bloqueo' es el proceso de agregar una proteína irrelevante para ocupar las zonas no cubiertas por antígeno en la fase sólida, evitando así la interacción no específica de los anticuerpos con el material de la placa.
¿Qué sucede durante la reacción antígeno-anticuerpo en un ensayo ELISA y cómo se lleva a cabo?
-Durante la reacción antígeno-anticuerpo, la muestra se pone en contacto con el antígeno absorbido en la superficie sólida. Los anticuerpos específicos, si están presentes, se unen al antígeno. Después de incubar y lavar, se separan los anticuerpos no unidos del complejo antígeno-anticuerpo.
¿Cómo se realiza la amplificación en un ensayo ELISA y qué se utiliza para ello?
-La amplificación se realiza mediante la reacción de un anticuerpo antiespecie conjugado con una enzima, como la peroxidasa, que reacciona con los anticuerpos unidos al antígeno. Esto permite la detección del complejo formado a través de la conversión de un sustrato en un producto coloreado.
¿Qué son los controles y cómo son importantes en un ensayo ELISA?
-Los controles son muestras que se utilizan para validar el proceso del ensayo ELISA. Incluyen controles negativos, positivos y blancos de lectura, que ayudan a determinar si la técnica está funcionando correctamente y a establecer puntos de corte para la interpretación de los resultados.
¿Cómo se pueden utilizar los kits de ELISA listos para el diagnóstico de enfermedades específicas?
-Los kits de ELISA listos para el diagnóstico de enfermedades específicas son preparados para facilitar la detección de marcadores biológicos asociados a ciertas enfermedades, permitiendo a los investigadores y médicos realizar análisis más rápidos y precisos.
Outlines
🔬 Introducción a la técnica ELISA
En este párrafo se presenta la técnica ELISA, destacando su uso para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas. Se explica que ELISA se basa en la unión de un antígeno a una fase sólida, y la detección de la reacción antígeno-anticuerpo mediante la adición de un anticuerpo conjugado con una enzima que produce un cambio de color. Además, se mencionan los ensayos indirectos y directos, así como sus aplicaciones en el diagnóstico de enfermedades infecciosas, como la detección del VIH y la COVID-19.
🧪 Procedimiento del ensayo ELISA
Este párrafo describe en detalle el procedimiento de un ensayo ELISA, comenzando con la absorción del antígeno en la fase sólida de una placa. Luego, se cubren pasos como el bloqueo para evitar interacciones no específicas, la reacción entre el antígeno y los anticuerpos, la amplificación del señal mediante un anticuerpo conjugado con una enzima, y finalmente, la medición de la densidad óptica del producto coloreado en un espectrofotómetro. También se discute la importancia de incluir controles negativos y positivos para asegurar la precisión del ensayo.
📦 Kits comerciales y conclusión
En este último párrafo, se menciona la disponibilidad de kits comerciales para la realización de ensayos ELISA, diseñados específicamente para la investigación y el diagnóstico de diversas enfermedades. El párrafo concluye con una invitación a los espectadores a darle 'like' al video, compartirlo, suscribirse al canal, y apoyar al creador en Patreon para acceder a contenido exclusivo y otros beneficios.
Mindmap
Keywords
💡ELISA
💡Antígeno
💡Anticuerpo
💡Sustrato
💡Conjugado
💡Amplificación
💡Diagnóstico
💡Sandwich ELISA
💡Coating
💡Bloqueo
💡Controles
Highlights
El vídeo explica la técnica ELISA, una herramienta utilizada para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas.
Los ensayos ELISA son conocidos por su sigla en inglés 'Enzyme-Linked Immunosorbent Assay'.
Se describen los principios básicos del ensayo ELISA, incluyendo la adsorción del antígeno en una fase sólida y la reacción con anticuerpos específicos.
Se menciona la técnica de 'sandwich ELISA' para la detección de antígenos específicos como proteínas.
La técnica indirecta de ELISA se utiliza para aumentar la sensibilidad del método mediante la reacción con un segundo anticuerpo antiespecie.
Se explica cómo se realiza una reacción directa en ELISA, donde un anticuerpo específico se conjuga con una enzima para revelar la presencia de un antígeno.
Los ensayos ELISA son utilizados en el diagnóstico de enfermedades infecciosas a través de la detección de anticuerpos en muestras sanguíneas.
Se destaca la detección del VIH como un ejemplo de aplicación de los ensayos ELISA en diagnósticos médicos.
Se menciona la técnica de 'sandwich ELISA' para el diagnóstico de embarazo, detectando la presencia de la hormona gonadotropina coriónica humana.
Los ensayos ELISA también se utilizan para el diagnóstico de la COVID-19, detectando antígenos del virus en muestras de sangre o saliva.
Existen versiones caseras de los ensayos ELISA, lo que permite su realización fuera de un laboratorio.
Se abordan los pasos del procedimiento ELISA, desde la coación del antígeno hasta el bloqueo, la reacción antígeno-anticuerpo y la amplificación con conjugados enzimas.
Se describe el uso de leche en polvo descremada para el bloqueo de la placa en el procedimiento ELISA.
Se explican los controles necesarios en un ensayo ELISA, como los controles negativos, positivos y los blancos de lectura para la evaluación de la técnica.
Se menciona la importancia de la optimización de cada paso en el ensayo ELISA para adaptarse a los requisitos específicos de la investigación o diagnóstico.
Se describe el análisis cualitativo y cuantitativo de los resultados de un ensayo ELISA, incluyendo la interpretación de la coloración y la construcción de curvas de dilución.
Existen kits de ELISA de lista comerciales, preparados específicamente para la investigación y el diagnóstico de enfermedades determinadas.
El vídeo invita a los espectadores a dar like, compartir y suscribirse al canal para recibir más información sobre técnicas y diagnósticos médicos.
Transcripts
en el vídeo de hoy vamos a ver la teoría
y práctica de la técnica elisa
bienvenidos a una nueva edición de nutri
mente
los ensayos de elisa están diseñados
para detectar y cuantificar
sustancias tales como péptidos proteínas
anticuerpos y hormonas también se los
conoce por las siglas e iu
de ensima inmuno a 6
que en español significa ensayo inmuno
enzimático para la determinación de
anticuerpos específicos antígeno en una
muestra por ejemplo los principios
básicos del ensayo incluyen la insólita
ción del antígeno por absorción pasiva a
una fase sólida
generalmente la superficie de un pocillo
de una placa de poliestireno tratado
aplicando luego la muestra los
anticuerpos específicos si están
presentes se unirán al antígeno
inmovilizado para poner en evidencia
esta reacción se debe revelar y
amplificar el complejo antígeno
anticuerpo formado en una reacción
directa esto se logra haciendo
reaccionar a dicho complejo con un
anticuerpo específico anti especie
conjugado acoplado covalente mente a una
enzima
dicha enzima transforma un sustrato
incoloro en un producto coloreado
soluble fácilmente medibles y la
densidad óptica obtenida es decir la
señal es proporcional a la cantidad de
complejo antígeno anticuerpo formado
un ensayo indirecto se utiliza para dar
mayor sensibilidad al método consiste en
hacer reaccionar los anticuerpos
específicos unidos al antígeno por lo
tanto que se encuentran en la fase
sólida con un segundo anticuerpo anti
especie
este segundo anticuerpo produce una
amplificación del primer complejo inmune
y al estar conjugado a una enzima da
lugar a una amplificación adicional de
la señal mediante la conversión de un
cromo gen o en un producto coloreado
medibles espectro fotométrica mente
estos tipos de ensayos se utilizan entre
otras cosas para el diagnóstico de
múltiples enfermedades infecciosas a
través de la detección de los
anticuerpos que nuestro cuerpo genera
para combatirlas por ejemplo podemos
mencionar la detección del vih mediante
la determinación de la presencia de
anticuerpos anti vih en el plasma
sanguíneo
[Música]
si en vez de anticuerpos queremos
detectar la presencia de un antígeno
determinado como una proteína por
ejemplo se puede utilizar la técnica de
elisa llamada sandwich en este caso
anticuerpos específicos para el antígeno
que se quiere detectar se absorben en
una placa cuando se agregan las muestras
que pueden ser plasma sanguíneo por
ejemplo estos anticuerpos capturan los
antígenos si los hubiera después de un
lavado se adiciona un segundo anticuerpo
que se une al antígeno creando un
complejo anticuerpo antígeno anticuerpo
que es como un sandwich
este segundo anticuerpo puede estar
acoplado a una enzima que permite la
detección al reaccionar con su sustrato
en un ensayo directo o se puede agregar
un tercer anticuerpo acoplado a enzima
para lograr mayor sensibilidad en un
ensayo in directo
este tipo de ensayos se utilizan por
ejemplo para el diagnóstico de embarazo
detectando la presencia de la hormona
gonadotropina coriónica humana en orina
o en sangre o para el diagnóstico del
cobi 19 detectando la presencia de
antígenos propios del virus en muestras
de sangre o saliva de pacientes que
sospechan tener la infección
estos ensayos tienen versiones que se
pueden realizar de manera casera
habiendo visto la teoría ahora vamos al
laboratorio virtual para ver la parte
práctica como existen variantes
significativas entre distintos
protocolos es importante poder decidir
cuál de ellos se ajusta mejor a nuestros
requisitos particulares siendo un ensayo
que involucra a múltiples variables es
necesario entonces optimizar cada paso
combinado con los demás en este caso
vamos a suponer que partimos de muestras
de suero y queremos hacer una lista
directo para determinar la presencia o
ausencia de un anticuerpo determinado
que llamaremos anticuerpo x
como mencionamos anteriormente en el
vídeo un ensayo directo para la
determinación de anticuerpos específicos
tiene tres capas el antígeno el
anticuerpo y el conjugado el
procedimiento tiene varios pasos el
primero se llama coaching se absorbe el
antígeno a la fase sólida que en general
son pocillos de una placa certificada
para esto se incuba una solución con
exceso de antígeno en los pocillos de la
placa durante toda la noche en la
heladera
luego se descarta el líquido bruscamente
y se seca la superficie con papel
absorbente sin lavar
el segundo paso es el bloqueo se
adiciona una proteína irrelevante para
que ocupes zonas de la fase sólida no
cubiertas por antígeno
de esta manera se evita que los
anticuerpos interactúen directamente con
el material de la placa produciendo
señales sin específicas para este fin en
nuestro caso vamos a incubar los
pocillos de la placa con 200 microlitros
de leche en polvo descremada ser
utilizada al 8% en base al carbonato
bicarbonato ph 96 durante una hora a 37
grados en agitación y luego se lavan los
pocillos tres veces con 200 microlitros
de pbs twin
el siguiente paso es la reacción
antígeno anticuerpo se pone en contacto
la muestra a estudiar con el antígeno
absorbido a la superficie sólida
es decir se siembra en cada posición 100
microlitros de muestras control o
incógnitas que en nuestro ejemplo serían
los sueros que queremos estudiar los
controles los mencionaremos más adelante
una vez hecho esto se incuba la placa en
cámara húmeda durante una hora a 37
grados luego se lava cada posición
cuatro veces con 200 microlitros de pbs
twin
los lavados permiten la separación de la
fase libre es decir de aquellos
anticuerpos que no se han unido al
antígeno inmovilizado de los anticuerpos
específicos unidos al antígeno
a continuación se realiza en la reacción
de amplificación el conjugado un
anticuerpo anti especie conjugado de la
enzima peroxidasa en nuestro ejemplo
reacciona con los anticuerpos que desea
detectarse ya unidos al antígeno
inmovilizado para esto se incuban los
pocillos de la placa con 100 microlitros
de una solución de anticuerpos
conjugados en cámara húmeda durante una
hora a 37 grados y luego se lava cada
pocillo cuatro veces con 200 microlitros
de pbs twin
por último se realiza el revelado en
donde la enzima conjuga del anticuerpo
reacciona con un sustrato incoloro para
transformarlo en un producto coloreado
se mide su densidad óptica en
espectrofotómetro
la cantidad de anticuerpos específicos
contra el antígeno inmovilizado estará
en relación directa a la conversión de
sustrato en producto por parte de la
enzima
al hacer una lista se deben correr al
menos los siguientes controles controles
negativos con suero en el que sabemos
que no hay anticuerpo x
controles positivos con suero que
contiene el anticuerpo x corrido en un
pocillo con antígeno y esto nos permite
ver qué es la técnica esté funcionando
correctamente
y blancos de lectura que se corren en
pocillos en los que no se pegó el
antígeno y representa la integración de
las fuentes de iu en específico de
conjugado más la conversión espontánea
del cromo gen o fotosensible se realiza
en pocillos sin antígeno en los que el
pp es edwin reemplaza al suero positivo
y en las etapas siguientes se agregan
los mismos reactivos que en el resto de
la placa el conjugado y al final el
sustrato
su densidad óptica se resta
automáticamente como blanco a todos los
pocillos
para el análisis cualitativo de los
resultados basta con observar la
coloración o no de cada posición siendo
la coloración indicativa de que el suero
sembrado en el pocillo correspondiente
contenía anticuerpos específicos contra
el antígeno inmovilizado en nuestro caso
el anticuerpo x en este caso se suele
tomar un punto de corte que se relaciona
con la densidad obtenida en el control
positivo
por otro lado para realizar un análisis
cuantitativo
pueden realizarse curvas con diluciones
seriadas de suero positivo de
concentración conocida así graficando el
logaritmo del factor de ilusión versus
la densidad óptica obtenida se pueden
hacer inferencias de las concentraciones
de anticuerpos presentes en las muestras
incógnitas por interpolación
en el mercado existen muchos kits de
lista que se comercializan y están
preparados específicamente para la
investigación y el diagnóstico de
enfermedades determinadas
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aprendiendo porque lo que sabes
influencia a tu estilo
[Música]
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