DNeasy visual protocol

Summary

Este video muestra cómo extraer ADN de alta calidad en solo 20 minutos utilizando los kits DNeasy Blood and Tissue de Qiagen. Diseñados para purificar rápidamente el ADN total de diversas muestras como tejidos animales, células, sangre, insectos y bacterias, estos kits no requieren extracción con fenol o cloroformo, ni precipitación con alcohol. El proceso comienza con la adición de proteinasa K y buffer, seguido de un proceso de centrifugación y lavado para purificar el ADN. El video también ofrece consejos para mejorar la eficiencia y rendimiento del proceso, y menciona la posibilidad de automatizar todo el procedimiento en la plataforma QIAcube.

Takeaways

• 🔬 El kit DNeasy Blood and Tissue está diseñado para purificar rápidamente el ADN total a partir de diversas muestras como tejidos animales, células, sangre, insectos y bacterias.
• 🌡️ No se requiere extracción con fenol o cloroformo, ni precipitación con alcohol, lo que simplifica el proceso de extracción del ADN.
• 🧪 Se suministran los buffers AW1 y AW2 como concentrados, y se deben diluir con etanol antes del uso.
• 💧 Se recomienda revisar los frasco de buffers AL y ATL para precipitados y, si los hay, redisolverlos.
• 🩸 Para muestras de sangre, se agrega proteinasa K a la muestra, luego se añade el buffer AL y se vortexea.
• 🔥 Se incuba la muestra de sangre durante 10 minutos a 56°C para facilitar la liberación del ADN.
• 🧊 Se añade etanol a la muestra para precipitar el ADN y se vortexea nuevamente.
• 🌀 Se utiliza una columna DNeasy Spin para purificar el ADN, eliminando los pasos de centrifugación y descarte de la solución intersticial.
• ⏱️ Se efectúa un segundo lavado con buffer AW2, que debe usarse a temperatura ambiente y离心ugado durante 3 minutos a alta velocidad para eliminar restos de etanol y sales.
• 🔋 Para obtener una mayor eficiencia en la extracción de ADN, se puede repetir el último paso de incubación y centrifugación.
• 📚 El ADN purificado está libre de inhibidores de la PCR, lo que permite su uso en técnicas sensibles como la PCR múltiplex, en tiempo real y secuenciación.

Q & A

¿Qué tipo de muestras se pueden utilizar con los kits de sangre y tejidos DN?

Se pueden utilizar muestras de tejidos animales, células, sangre, insectos y bacterias.

¿Es necesario usar fenol o cloroformo en el proceso de extracción de ADN?

No, el proceso no requiere extracción con fenol o cloroformo ni precipitación con alcohol.

¿Qué se debe hacer antes de usar los buffers aw1 y aw2 por primera vez?

Antes de usar los buffers aw1 y aw2 por primera vez, se debe agregar la cantidad recomendada de etanol a las botellas.

¿Qué se debe hacer si hay precipitados en los buffers Al o ATL?

Si hay precipitados en los buffers Al o ATL, se deben redisolver antes de continuar.

¿Cuál es el propósito de la proteina K en este protocolo?

La proteina K se utiliza para lisar las células y liberar el ADN.

¿Qué se debe hacer para aumentar el rendimiento del ADN?

Para aumentar el rendimiento de ADN, se puede reducir la cantidad de material inicial, extender el tiempo de incubación o aumentar la cantidad de proteina K.

¿Cuál es el propósito del centrifugado en este protocolo?

El centrifugado se utiliza para separar el ADN del resto de los componentes en la muestra, permitiendo que el ADN quede en la columna de centrifugado.

¿Qué pasos se deben seguir para evitar la presencia de etanol y sales no deseados en la muestra final?

Para evitar la presencia de etanol y sales no deseados, se debe descartar el flujo residual y centrifugar nuevamente durante un minuto más a 13,000 RPM.

¿Qué función tiene el buffer AE en el protocolo?

El buffer AE se utiliza para eluir el ADN de la columna de centrifugado.

¿Cómo se puede obtener un mayor rendimiento de ADN durante la elución?

Para obtener un mayor rendimiento de ADN, se puede repetir el último paso de elución para aumentar la eficiencia del proceso.