Práctica 5

ALEJANDRA NATALI VEGA MAGANA

20 May 202120:57

Summary

TLDREn este video se presenta la práctica número 5 sobre rFLP, PCR, clonación y secuenciación, técnicas fundamentales en biología molecular. Se explican los pasos para la extracción de ADN, la amplificación mediante PCR y el análisis de mutaciones a través de digestión enzimática y electroforesis. Además, se discuten las diferencias entre la secuenciación Sanger y la de nueva generación (NGS), así como sus aplicaciones en diagnóstico clínico y estudios genéticos. Se resalta la importancia de estas metodologías en la investigación biomédica, incluyendo la identificación de mutaciones y el estudio de la microbiota.

Takeaways

😀 La técnica RFLP (Polimorfismo de Longitud de Fragmentos de Restricción) se utiliza para detectar polimorfismos y mutaciones en el ADN.
🔬 La PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) es fundamental para amplificar el ADN antes de realizar análisis posteriores.
⚙️ Las enzimas de restricción permiten cortar el ADN en lugares específicos, lo que ayuda a identificar mutaciones.
⚡ El corrimiento electroforético es crucial para separar y visualizar fragmentos de ADN, permitiendo la interpretación de los resultados.
🔍 La interpretación de los resultados de la RFLP revela si un paciente es homocigoto o heterocigoto respecto a una mutación.
📊 La clonación de genes implica insertar un gen de interés en plásmidos, lo cual requiere un proceso cuidadoso para evitar errores.
🧬 La secuenciación de Sanger y la secuenciación de nueva generación (NGS) son técnicas utilizadas para analizar secuencias de ADN.
🌟 La pirosecuenciación permite detectar la liberación de pirofosfato durante la adición de nucleótidos, lo que facilita la secuenciación.
🧪 La secuenciación de nueva generación permite la amplificación de múltiples fragmentos de ADN de forma paralela, ofreciendo una mayor eficiencia.
🔎 La secuenciación se puede aplicar en diversos campos, como diagnóstico clínico, determinación de paternidad y estudios de microbiota.

Q & A

¿Qué es la técnica RFLP y para qué se utiliza?
-La técnica RFLP (Polimorfismo de Longitud de Fragmentos de Restricción) se utiliza en biología molecular para detectar polimorfismos, mutaciones simples, lesiones e inserciones en el ADN.
¿Cuáles son los pasos básicos en la metodología de RFLP?
-Los pasos básicos incluyen la extracción de ADN de las células, la amplificación del ADN mediante PCR, y la digestión enzimática del producto de amplificación con enzimas de restricción.
¿Cómo se interpreta un gel de electroforesis después de aplicar RFLP?
-La interpretación se basa en el número de bandas y su peso molecular. Por ejemplo, una banda única indica un homocigoto sin mutación, mientras que múltiples bandas pueden indicar heterocigos o presencia de mutaciones.
¿Qué significa ser homocigoto y heterocigoto?
-Ser homocigoto significa que ambos alelos son iguales (pueden ser mutados o no), mientras que ser heterocigoto significa que se tiene un alelo mutado y otro no mutado.
¿Qué papel juegan los plásmidos en la clonación?
-Los plásmidos se utilizan para insertar un gen de interés dentro de un microorganismo, facilitando la producción de proteínas deseadas.
¿Cuáles son los principales tipos de secuenciación mencionados?
-Se mencionan la secuenciación Sanger, la secuenciación de nueva generación (NGS) y la pirosecuenciación.
¿Cuál es la diferencia clave entre la secuenciación Sanger y la NGS?
-La secuenciación Sanger es adecuada para secuenciar fragmentos específicos y no variables, mientras que NGS permite la secuenciación masiva de múltiples fragmentos de ADN simultáneamente.
¿Qué son los nucleótidos marcados y su función en la secuenciación?
-Los nucleótidos marcados son nucleótidos que emiten luz cuando son incorporados en la cadena de ADN, lo que permite detectar la secuencia durante la amplificación.
¿Qué se busca al secuenciar el gen ribosomal 16S en microbiota?
-Se busca amplificar y secuenciar las regiones variables del gen ribosomal 16S para determinar la composición de las bacterias presentes en una muestra.
¿Cuáles son algunas aplicaciones de la secuenciación de nueva generación?
-Las aplicaciones incluyen el diagnóstico de enfermedades genéticas, estudios de microbiota, y la investigación del cáncer mediante análisis de perfiles de expresión.