DNeasy visual protocol
Summary
TLDREste video muestra cómo extraer ADN de alta calidad en solo 20 minutos utilizando los kits DNeasy Blood and Tissue de Qiagen. Diseñados para purificar rápidamente el ADN total de diversas muestras como tejidos animales, células, sangre, insectos y bacterias, estos kits no requieren extracción con fenol o cloroformo, ni precipitación con alcohol. El proceso comienza con la adición de proteinasa K y buffer, seguido de un proceso de centrifugación y lavado para purificar el ADN. El video también ofrece consejos para mejorar la eficiencia y rendimiento del proceso, y menciona la posibilidad de automatizar todo el procedimiento en la plataforma QIAcube.
Takeaways
- 🔬 El kit DNeasy Blood and Tissue está diseñado para purificar rápidamente el ADN total a partir de diversas muestras como tejidos animales, células, sangre, insectos y bacterias.
- 🌡️ No se requiere extracción con fenol o cloroformo, ni precipitación con alcohol, lo que simplifica el proceso de extracción del ADN.
- 🧪 Se suministran los buffers AW1 y AW2 como concentrados, y se deben diluir con etanol antes del uso.
- 💧 Se recomienda revisar los frasco de buffers AL y ATL para precipitados y, si los hay, redisolverlos.
- 🩸 Para muestras de sangre, se agrega proteinasa K a la muestra, luego se añade el buffer AL y se vortexea.
- 🔥 Se incuba la muestra de sangre durante 10 minutos a 56°C para facilitar la liberación del ADN.
- 🧊 Se añade etanol a la muestra para precipitar el ADN y se vortexea nuevamente.
- 🌀 Se utiliza una columna DNeasy Spin para purificar el ADN, eliminando los pasos de centrifugación y descarte de la solución intersticial.
- ⏱️ Se efectúa un segundo lavado con buffer AW2, que debe usarse a temperatura ambiente y离心ugado durante 3 minutos a alta velocidad para eliminar restos de etanol y sales.
- 🔋 Para obtener una mayor eficiencia en la extracción de ADN, se puede repetir el último paso de incubación y centrifugación.
- 📚 El ADN purificado está libre de inhibidores de la PCR, lo que permite su uso en técnicas sensibles como la PCR múltiplex, en tiempo real y secuenciación.
Q & A
¿Qué tipo de muestras se pueden utilizar con los kits de sangre y tejidos DN?
-Se pueden utilizar muestras de tejidos animales, células, sangre, insectos y bacterias.
¿Es necesario usar fenol o cloroformo en el proceso de extracción de ADN?
-No, el proceso no requiere extracción con fenol o cloroformo ni precipitación con alcohol.
¿Qué se debe hacer antes de usar los buffers aw1 y aw2 por primera vez?
-Antes de usar los buffers aw1 y aw2 por primera vez, se debe agregar la cantidad recomendada de etanol a las botellas.
¿Qué se debe hacer si hay precipitados en los buffers Al o ATL?
-Si hay precipitados en los buffers Al o ATL, se deben redisolver antes de continuar.
¿Cuál es el propósito de la proteina K en este protocolo?
-La proteina K se utiliza para lisar las células y liberar el ADN.
¿Qué se debe hacer para aumentar el rendimiento del ADN?
-Para aumentar el rendimiento de ADN, se puede reducir la cantidad de material inicial, extender el tiempo de incubación o aumentar la cantidad de proteina K.
¿Cuál es el propósito del centrifugado en este protocolo?
-El centrifugado se utiliza para separar el ADN del resto de los componentes en la muestra, permitiendo que el ADN quede en la columna de centrifugado.
¿Qué pasos se deben seguir para evitar la presencia de etanol y sales no deseados en la muestra final?
-Para evitar la presencia de etanol y sales no deseados, se debe descartar el flujo residual y centrifugar nuevamente durante un minuto más a 13,000 RPM.
¿Qué función tiene el buffer AE en el protocolo?
-El buffer AE se utiliza para eluir el ADN de la columna de centrifugado.
¿Cómo se puede obtener un mayor rendimiento de ADN durante la elución?
-Para obtener un mayor rendimiento de ADN, se puede repetir el último paso de elución para aumentar la eficiencia del proceso.
Outlines
🧬 Procedimiento de Extracción de ADN con DNeasy Blood and Tissue Kits
Este video presenta un protocolo visual para extraer ADN de alta calidad en solo 20 minutos utilizando los kits DNeasy Blood and Tissue de Qiagen. Los kits están diseñados para purificar rápidamente el ADN total a partir de diversas muestras, incluyendo tejidos animales, células, sangre, insectos y bacterias. No se requiere extracción con fenol o cloroformo, ni precipitación con alcohol. El contenido del kit incluye buffers AW1 y AW2, que deben diluirse con etanol antes del uso. Se describen los pasos para agregar proteinasa K y los buffers correspondientes a las muestras de sangre o tejido, y se detallan las pautas para incrementar la eficiencia de la extracción, como reducir la cantidad de material inicial, asegurar una lización completa de la muestra, y extender el tiempo de incubación o aumentar la cantidad de proteinasa K si es necesario. Se menciona la incubación de las muestras sanguíneas a 56°C y la posterior adición de etanol. El proceso continúa con la transferencia de la mezcla a un columna DNeasy Spin, la centrifugación y el descarte del flujo a través. Se describen los pasos para la limpieza del ADN con buffers AW1 y AW2, y se sugieren consejos para evitar el carry-over de etanol y sales. Finalmente, se extrae el ADN con buffer AE y se enfatiza la importancia de repetir el último paso para aumentar la eficiencia de la extracción. El video también menciona la compatibilidad del ADN purificado con la detección sensible en PCR, secuenciación y análisis múltiples, y la posibilidad de automatizar el proceso en el KayaCube, pudiendo procesar hasta 12 muestras simultáneamente. El manual DNeasy Blood and Tissue puede descargarse desde el sitio web de Qiagen.
Mindmap
Keywords
💡Extracción de ADN
💡Phenol y cloroformo
💡Precipitación con alcohol
💡Buffer AW1 y AW2
💡Proteinasa K
💡Vortex
💡Incubación
💡Columna DNeasy Spin
💡PCR
💡Kaya Cube
Highlights
Extract pure, high-quality DNA in just 20 minutes
DNeasy Blood and Tissue kits designed for quick DNA purification
Suitable for various sample sources including animal tissues, cells, blood, insects, and bacteria
No phenol or chloroform extraction required
No alcohol precipitation needed
Buffer AW1 and AW2 supplied as concentrates
Add recommended amount of ethanol to buffers before first use
Check for precipitates in buffer AL and ATL bottles and redissolve if present
Add proteinase K to the sample and vortex
Incubate blood samples for 10 minutes at 56°C
Add ethanol and vortex to increase DNA yield
Tips for reducing starting material and ensuring full lysis
Extend incubation time or increase proteinase K amount if pellet remains
Pipet mixture into DNeasy spin column and centrifuge
Discard flow-through and collection tube after centrifugation
Add buffer AW1 for the first wash step and centrifuge
Use buffer AW2 for the second wash step and centrifuge at 13,000 RPM
Avoid unwanted ethanol and salt carryover by discarding flow-through
Reuse collection tube and centrifuge further to ensure buffer AW1 is added before AW2
Buffer AW2 should be used at room temperature
Add buffer AE to spin column for DNA elution
Incubate at room temperature and centrifuge to extract DNA
Repeating the last step increases elution efficiency
Purified DNA is free from PCR inhibitors, suitable for sensitive detection and sequencing
All steps can be automated on the QIAcube for up to 12 samples simultaneously
Download DNeasy Blood and Tissue handbook from QIAGEN's website
Transcripts
kyogen sample and assay
[Music]
Technologies welcome to the kayen DN
easy visual protocol in this video we
will show you how to extract pure
highquality DNA in just 20 minutes DN
Blood and Tissue kits are designed to
quickly purify total DNA from various
sample sources these include animal
tissues cells blood insects and bacteria
no phenol or chloroform extraction or
alcohol precipitation is
[Music]
required inside the box you'll find
buffer aw1 and aw2 which are supplied as
concentrates before using these for the
first time add the recommended amount of
ethanol into the
bottles next check the buffer Al and ATL
bottles for
precipitates if present redissolve these
[Music]
the Lis Begins by adding the proteinas K
to the
sample then add buffer Al for blood
samples or buffer ATL for tissue
[Music]
samples and Vortex
thoroughly if you are working with blood
incubate the sample for 10 minutes at
56° C
add 200 microl of ethanol and Vortex
[Music]
thoroughly to increase the DNA yield try
the following
tips reduce the amount of starting
material to ensure the sample is fully
lized if a pellet remains extend the
incubation time or increase the amount
of proteinas K
[Music]
pipet the mixture into a DN easy spin
[Music]
column centrifuge for 1
[Music]
minute discard the flow through and
collection
tube place the spin column into a new
collection
tube add 500 micr of buffer aw1
[Music]
centrifuge for 1
minute discard the flowr and collection
tube for the second wash step use 500
micr of buffer
aw2 centrifuge for 3 minutes at 13,000
RPM discard the flow through and
collection tube for optimal results try
the following tips to avoid The Unwanted
ethanol and salt Carri
over discard the flow through reuse the
collection tube and centrifuge for a
further minute at 13,000
RPM make sure that buffer aw1 is added
before buffer
aw2 buffer aw2 should be used at room
[Music]
temperature place the spin column into a
new microcentrifuge tube add 200 micr of
buffer a
e incubate for 1 minute at room
temperature centrifuge for 1 minute to
extract the
eluate for a higher DNA yield repeating
the last step increases the illusion
efficiency for small volumes the
purified DNA is free from PCR Inhibitors
enabling sensitive detection in standard
Multiplex and realtime PCR and
sequencing all steps in this visual
protocol can be fully automated on the
Kaya Cube up to 12 samples can be
processed
simultaneously you can download the DNZ
Blood and Tissue handbook from our
[Music]
website
kyogen sample and assay Technologies
[Music]
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