Microbiología. Antibiograma por difusión en disco.

Summary

Este video explica el método de antibiograma por difusión en disco, conocido como Kirby-Bauer, para evaluar la susceptibilidad de bacterias a antimicrobianos. Se describe el procedimiento, que implica colocar discos impregnados con antibióticos sobre un medio de cultivo con bacterias. La difusión del antibiótico genera un halo de inhibición, cuyo tamaño indica la sensibilidad bacteriana. También se mencionan consideraciones técnicas como la incubación, el uso de medios de cultivo específicos y el control de calidad, junto con la interpretación de resultados según los criterios del CLSI, detallando cómo reportar resistencias y sensibilidades bacterianas.

Takeaways

• 🧫 El método de difusión en disco, también conocido como Kirby-Bauer, es uno de los más utilizados en bacteriología para medir la susceptibilidad de microorganismos a antimicrobianos.
• 💊 Los discos de papel filtro impregnados con antimicrobianos se colocan sobre un medio de cultivo sólido donde se siembra la bacteria, permitiendo observar zonas de inhibición que indican sensibilidad.
• 🌡️ Las condiciones de almacenamiento de los discos antimicrobianos son críticas; por ejemplo, los beta-lactámicos deben mantenerse congelados y otros antimicrobianos pueden refrigerarse por un máximo de 7 días.
• 🔬 El agar Mueller-Hinton es el medio recomendado por su reproducibilidad, bajo contenido de inhibidores y capacidad para evaluar sulfonamidas, trimetoprim y tetraciclinas.
• 🦠 La profundidad del agar debe estar entre 3 y 5 mm, ya que profundidades menores o mayores pueden generar lecturas erróneas de susceptibilidad o resistencia.
• 📏 El diámetro de la zona de inhibición se mide en milímetros y se utiliza para determinar si una bacteria es sensible, intermedia o resistente a un antibiótico específico.
• 🔄 La siembra se realiza en tres direcciones diferentes para garantizar una distribución homogénea de las bacterias en el medio de cultivo.
• 🧪 El patrón de turbidez de McFarland se utiliza para estandarizar la densidad del inóculo bacteriano, siendo el 0.5 el más comúnmente utilizado.
• 🌡️ La incubación se realiza a 35°C por 18 a 24 horas en atmósfera ambiente, pero para algunos microorganismos exigentes, como estreptococos o Neisseria, se requiere CO2 al 5%.
• 📝 La interpretación de los resultados debe realizarse comparando los diámetros de inhibición con las tablas del CLSI, y el reporte debe incluir la resistencia o sensibilidad a los antimicrobianos utilizados.

Q & A

¿Qué es el método de difusión en disco o Kirby-Bauer?

El método de difusión en disco o Kirby-Bauer es una técnica estandarizada en los laboratorios de bacteriología para medir la susceptibilidad de los microorganismos patógenos a los antimicrobianos. Consiste en colocar discos impregnados con antimicrobianos sobre un medio de cultivo sólido donde se ha sembrado la bacteria.

¿Cómo se interpreta la sensibilidad de una bacteria en el método de Kirby-Bauer?

La sensibilidad se interpreta observando la zona clara de inhibición del crecimiento alrededor del disco. El diámetro de esta zona, medido en milímetros, es proporcional a la susceptibilidad de la bacteria al antimicrobiano.

¿Qué factores pueden afectar la interpretación del antibiograma?

La interpretación del antibiograma puede verse afectada por las condiciones técnicas del proceso, como la cinética de crecimiento de la bacteria, el número de bacterias, la fase de crecimiento del inóculo, y las características del medio de cultivo, como el pH y la concentración de cationes.

¿Cuál es la importancia de las condiciones de almacenamiento de los discos antimicrobianos?

Los discos antimicrobianos deben mantenerse refrigerados a 8 grados centígrados o congelados a menos de -14 grados centígrados para preservar su eficacia. Algunos antibióticos, como los beta-lactámicos, son más estables si se congelan.

¿Por qué se utiliza el agar Mueller-Hinton en el método de difusión en disco?

El agar Mueller-Hinton se utiliza debido a su reproducibilidad aceptable y baja concentración de inhibidores, lo que es importante para evaluar la actividad de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina. Además, permite un crecimiento satisfactorio de patógenos no exigentes.

¿Qué es el estándar de McFarland y para qué se utiliza?

El estándar de McFarland es una referencia para ajustar la turbidez del inóculo bacteriano a una densidad específica. Se utiliza para asegurar que el número de bacterias sea adecuado para el ensayo, lo que permite obtener resultados consistentes y precisos.

¿Cómo se debe incubar el medio de cultivo en el método de Kirby-Bauer?

El medio de cultivo se debe incubar a 35 grados centígrados durante 18 a 24 horas en atmósfera ambiente. En el caso de microorganismos exigentes como estreptococos, Haemophilus o Neisseria, la incubación se realiza en atmósfera de CO2 al 5%.

¿Qué se debe tener en cuenta al leer los halos de inhibición en el antibiograma?

Se deben considerar el tipo de medio utilizado y la luz empleada para la lectura. Por ejemplo, para medios translúcidos, se usa luz reflejada, mientras que para medios opacos, se retira la tapa e ilumina con luz reflejada. Además, se debe medir siempre el diámetro de la zona de inhibición.

¿Cómo se interpretan las zonas de inhibición en caso de crecimiento anómalo?

Si se observa una zona de inhibición con colonias en su interior, puede tratarse de un cultivo mixto o de una subpoblación resistente. En estos casos, se debe aislar y evaluar nuevamente la susceptibilidad de las colonias observadas.

¿Qué indica un resultado 'no sensible' en un antibiograma?

Un resultado 'no sensible' se utiliza para aislamientos con un único criterio de interpretación como sensible, pero que no cumplen con los valores de corte establecidos. No implica necesariamente un mecanismo de resistencia, pero se recomienda repetir las pruebas para confirmar los resultados.