ELECTROFORESIS de ADN en GEL de AGAROSA [TEÓRICO y PRÁCTICO]

Nutrimente

28 Jun 202112:19

Summary

TLDREl vídeo explica la técnica de electroforesis, utilizada para separar moléculas como ADN, ARN o proteínas según su tamaño y carga eléctrica en un campo eléctrico. Se enfoca en la electroforesis en gel de agarosa, donde las moléculas de ADN se separan según su longitud en pares de bases. Se detalla el proceso de preparación del gel, la incorporación de bromuro de tibio, la carga de muestras y marcadores de peso molecular, y la corrida del gel. Finalmente, se visualizan las bandas de ADN en un transiluminador UV, permitiendo determinar su tamaño y comprobar la eficacia de técnicas como la PCR.

Takeaways

🔬 Electroforesis es una técnica utilizada para separar moléculas en base a su tamaño y carga eléctrica en un campo eléctrico.
🧬 Los científicos aplican electroforesis para separar ADN, ARN y proteínas en el laboratorio.
📊 La electroforesis en gel de agarosa es una forma específica de esta técnica que permite la separación de moléculas a través de una matriz porosa.
⚡️ Los ácidos nucleicos, debido a su estructura con grupos fosfato, tienen una carga negativa y migran hacia el ánodo en la electroforesis.
🔑 La velocidad de migración de las moléculas en el gel se ve influenciada por la fuerza eléctrica y la fuerza de rozamiento.
🌐 La fuerza de rozamiento es directamente proporcional al tamaño y forma de la molécula, y a las características del medio como la viscosidad.
🧪 El ADN de doble cadena en una solución acuosa no se separa eficientemente debido a la baja fricción, lo que requiere el uso de un medio soporte como el gel.
🌀 Los gels de agarosa y poliacrilamida son comunes en laboratorios para proporcionar una red molecular que aumenta la fricción y reduce la difusión.
📏 La elección del porcentaje de agarosa en el gel afecta el tamaño del poro y, por ende, la separación de fragmentos de ADN de diferentes longitudes.
🔎 Los marcadores de peso molecular son esenciales para determinar el tamaño de los fragmentos de ADN durante la electroforesis, permitiendo comparar y estimar longitudes.

Q & A

¿Qué es la electroforesis y para qué se utiliza?
-La electroforesis es una técnica que sirve para la separación de moléculas según su movilidad en un campo eléctrico. Se utiliza en el laboratorio para separar moléculas de ADN, ARN o proteínas en base a su tamaño y carga eléctrica.
¿En qué dirección migran los ácidos nucleicos durante la electroforesis?
-Los ácidos nucleicos, debido a su carga negativa, migran hacia el polo positivo, es decir, hacia el ánodo.
¿Qué fuerzas afectan la velocidad de las partículas en la electroforesis?
-Las partículas en la electroforesis están sujetas a dos fuerzas de acción opuestas: la fuerza eléctrica que atrae a la partícula hacia el electrodo y la fuerza de rozamiento que se opone a su migración.
¿Cómo se relaciona la carga y el tamaño de una molécula con su migración en el gel durante la electroforesis?
-Cuanta más carga y menor masa tenga la molécula, más rápido migrará a través del gel. Por otro lado, más pequeña y flexible sea la molécula, más rápido emigrará.
¿Qué es un gel de agarosa y cómo se utiliza en la electroforesis?
-Un gel de agarosa es una matriz porosa utilizada en la electroforesis para separar macromoléculas. Aumenta la fricción recibida por las macromoléculas y reduce la difusión, permitiendo una separación eficiente.
¿Cómo se prepara una solución de agarosa para el gel de electroforesis?
-Se mezcla agarosa con buffer de corrida y se calienta en microondas hasta que la agarosa se disuelva. Se agrega bromuro de tibio para visualizar el ADN más tarde.
¿Qué es un marcador de peso molecular y cómo se utiliza en la electroforesis?
-Un marcador de peso molecular es una mezcla de fragmentos de ADN de tamaño conocido que se utiliza para comparar las muestras en la corrida y determinar el tamaño de los fragmentos de ADN en las muestras.
¿Cuál es el propósito de agregar bromuro de tibio al gel de agarosa?
-El bromuro de tibio es un intercalante del ADN que permite visualizar las moléculas de ADN una vez que el gel es expuesto a luz ultravioleta, ya que se torna fluorescente.
¿Cómo se determinan los tamaños de los fragmentos de ADN en una electroforesis en gel de agarosa?
-Se compara la distancia migrada por los fragmentos de ADN con la del marcador de peso molecular en paralelo, lo que permite estimar el tamaño de los fragmentos en la muestra incógnita.
¿En qué áreas tiene aplicación la electroforesis en gel de agarosa?
-La electroforesis en gel de agarosa tiene múltiples aplicaciones en la medicina, genética, biotecnología, ingeniería genética y en el ámbito forense y en el reconocimiento de personas.