OBTENCIÓN DE ADN RECOMBINANTE

Summary

En este video se explora el proceso de creación de ADN recombinante, que consiste en insertar un gen específico en un vector para introducirlo en una célula hospedadora. A través de diferentes etapas, como la localización y corte del gen, la preparación del vector y la integración del ADN recombinante en la célula, se obtiene un organismo modificado genéticamente. Además, se presentan los métodos de selección y detección de células con el gen recombinante, destacando la importancia de estas técnicas en la ingeniería genética para la producción de proteínas útiles como hormonas.

Takeaways

• 😀 La técnica del ADN recombinante consiste en introducir un gen específico dentro de un vector para insertarlo en una célula anfitriona, donde se traducirá y sintetizará la proteína deseada.
• 😀 El proceso incluye localizar el gen de interés, cortarlo con enzimas de restricción, preparar un vector de clonación y formar el ADN recombinante.
• 😀 Las enzimas de restricción son utilizadas para cortar el ADN en lugares específicos, generando fragmentos con extremos romos o cohesivos.
• 😀 Los vectores de clonación son moléculas de ADN que transportan el gen de interés e incluyen su propio origen de replicación para generar copias dentro de la célula anfitriona.
• 😀 Se utilizan vectores como plásmidos, bacteriófagos y cromosomas artificiales para insertar el gen en bacterias u otros organismos.
• 😀 El ADN recombinante se introduce en la célula anfitriona utilizando diferentes métodos, como virus, bacterias, microesferas o electroporación.
• 😀 Las células anfitrionas más comunes son bacterias, ya que tienen una alta tasa de replicación, bajo costo y son fáciles de manipular.
• 😀 También se pueden usar células eucariotas, como levaduras y células tumorales, para la clonación de transgenes y la producción de proteínas.
• 😀 Para inducir la división de las células anfitrionas y propagar el ADN recombinante, se usan métodos específicos según el tipo de célula (bacteria o eucariota).
• 😀 La selección de las células recombinantes se realiza utilizando métodos como la adición de sondas de ADN, la detección de proteínas específicas, y el uso de genes de resistencia a antibióticos.
• 😀 El proceso completo se resume en localizar el gen, cortarlo, insertarlo en un vector, introducirlo en una célula, y luego seleccionar las células que contienen y expresan correctamente el gen.

Q & A

¿Qué es el ADN recombinante y cómo se obtiene?

El ADN recombinante es el resultado de introducir un gen de interés dentro de un vector, que luego se inserta en una célula hospedadora. Esta célula replica el ADN y sintetiza la proteína codificada por el gen de interés.

¿Cuáles son las etapas principales para obtener un ADN recombinante?

Las etapas principales son: localizar el gen de interés, cortarlo con enzimas de restricción, preparar un vector de clonación, formar el ADN recombinante, introducirlo en una célula hospedadora, propagar el cultivo y finalmente detectar y seleccionar los clones recombinantes.

¿Qué son las enzimas de restricción y cuál es su función?

Las enzimas de restricción son proteínas que cortan el ADN en secuencias específicas de nucleótidos. Son utilizadas en ingeniería genética para cortar tanto el gen de interés como el vector de clonación de manera precisa.

¿Qué tipos de extremos pueden resultar del corte del ADN con enzimas de restricción?

El corte puede generar extremos romos o cohesivos. Los extremos cohesivos permiten que los fragmentos de ADN se unan con mayor facilidad debido a la complementariedad de sus bases.

¿Qué es un vector de clonación y cuál es su propósito?

Un vector de clonación es una molécula de ADN que transporta el gen de interés e lo introduce en la célula hospedadora. Además, el vector tiene un origen de replicación para hacer copias del ADN y suele llevar genes de selección como resistencia a antibióticos.

¿Qué tipos de células pueden ser utilizadas como células hospedadoras?

Las células hospedadoras pueden ser bacterianas, eucariotas (como levaduras y células animales), y células embrionarias. La elección depende del tipo de gen y la proteína que se desea producir.

¿Cuáles son algunos de los métodos para introducir el ADN recombinante en la célula hospedadora?

Algunos métodos son la infección con virus o bacterias que sirven como vectores, el bombardeo de células con microesferas recubiertas de ADN recombinante, y la electroporación, que usa descargas eléctricas para permitir la entrada del ADN en las células.

¿Por qué es necesario seleccionar las células que han adquirido el ADN recombinante?

No todas las células hospedadoras adquieren el ADN recombinante. Por lo tanto, es necesario usar métodos de selección, como la resistencia a antibióticos o la síntesis de una proteína específica, para identificar las células que han incorporado el gen de interés.

¿Cómo se detectan los clones recombinantes?

Los clones recombinantes se pueden detectar mediante sondas de ADN que identifican el ADN recombinante o por la identificación de proteínas codificadas por el gen recombinante utilizando anticuerpos específicos.

¿Qué es la electroporación y cómo funciona en el proceso de ingeniería genética?

La electroporación es un método que utiliza descargas eléctricas para crear poros temporales en la membrana celular, permitiendo que el ADN recombinante entre en la célula hospedadora.