Determinación espectrofotométrica de clorofila: Método tricromático | | UPV

Summary

En este video, se muestra el procedimiento para determinar la concentración de clorofila en muestras de agua utilizando el método cromático. Se explica cómo realizar la filtración y extracción de pigmentos fotosintéticos, seguidos de mediciones espectrofotométricas a longitudes de onda específicas para calcular las concentraciones de clorofila a, b y c. Además, se detallan los materiales necesarios y las fórmulas aplicadas para obtener resultados precisos. Este proceso permite evaluar la presencia de clorofila en ambientes acuáticos, crucial para estudios ecológicos y de biodiversidad.

Takeaways

• 😀 La clorofila es un pigmento fotosintético crucial para organismos autótrofos, como plantas, algas y cianobacterias.
• 😀 Existen diferentes tipos de clorofila: a, b, y c, cada uno con diferencias en su estructura química y funciones.
• 😀 El objetivo del método cromático es determinar la concentración de los distintos tipos de clorofila en muestras de agua.
• 😀 El procedimiento de determinación de clorofila involucra tres pasos principales: filtración, extracción de pigmentos, y medición espectrofotométrica.
• 😀 La filtración de la muestra es el primer paso y se realiza utilizando membranas de nitrocelulosa para separar el material particulado que contiene clorofila.
• 😀 El material particulado filtrado se congela para facilitar la liberación de pigmentos y mejorar la extracción.
• 😀 La extracción de los pigmentos se hace usando acetona al 90% y se guarda la muestra en oscuridad a 4°C durante un periodo de 2 a 24 horas.
• 😀 La separación del extracto líquido de los residuos se realiza mediante centrifugación a 2,500 revoluciones por minuto durante 5 minutos.
• 😀 La determinación espectrofotométrica se lleva a cabo a cuatro longitudes de onda: 630, 647, 664, y 750 nm, para medir la absorción de los pigmentos.
• 😀 Los resultados obtenidos se utilizan en fórmulas específicas para calcular la concentración de clorofila en la muestra, expresada en miligramos por metro cúbico.
• 😀 El proceso descrito permite analizar y calcular las concentraciones de clorofila en muestras de agua de manera precisa y cuantitativa.

Q & A

¿Cuál es el objetivo principal del método cromático descrito en el vídeo?

El objetivo principal del método cromático es determinar la concentración de los distintos tipos de clorofila en muestras de agua.

¿Cómo está formada la molécula de clorofila?

La molécula de clorofila está formada por un núcleo porfirínico con cuatro anillos pirrólicos, representados en color rosa, en cuyo centro se encuentra un átomo de magnesio. Además, posee un grupo fito rico en grupos metilo que forma una cadena lateral.

¿Cuál es la principal función de las clorofilas en los organismos fotosintéticos?

La principal función de las clorofilas es transformar la energía lumínica en energía química durante el proceso de fotosíntesis.

¿Qué diferencia a las clorofila a, b y c?

La clorofila a posee un grupo metilo, mientras que la clorofila b tiene un grupo aldehído. La clorofila c, a diferencia de las otras, carece del grupo fito, y generalmente es una mezcla molecular de las formas clorofila c1 y c2.

¿Qué organismos contienen clorofila?

Las clorofilas están presentes en organismos fotoautótrofos como las cianobacterias, algas y plantas superiores.

¿Qué materiales son necesarios para la filtración de las muestras?

Para la filtración se necesita membranas filtrantes de nitrocelulosa de 47 mm de diámetro y 0.45 micras de poro, embudo, bomba de vacío, pinzas, probeta, papel de aluminio y tubos de polietileno.

¿Cuál es el propósito de la congelación de la muestra después de la filtración?

La congelación de la muestra tiene como finalidad conservarla y romper las células para facilitar la liberación de los pigmentos durante el proceso posterior de extracción.

¿Qué tipo de solvente se usa para la extracción de los pigmentos?

Se utiliza acetona al 90% para la extracción de los pigmentos de las muestras.

¿Cómo se realiza la medición de las absorbancias para determinar las concentraciones de clorofila?

Las absorbancias se miden a cuatro longitudes de onda: 630, 647, 664 y 750 nanómetros, utilizando un espectrofotómetro y cubetas de cuarzo para medir el extracto líquido.

¿Cómo se calculan las concentraciones de clorofila a partir de las absorbancias?

Las concentraciones de clorofila se calculan utilizando fórmulas específicas en las que se sustituyen los valores de absorbancia obtenidos a las diferentes longitudes de onda, el volumen de muestra filtrado y el volumen de extracto.