Aseptic Techniques, Antimicrobial Substances and Microbial Growth (AS and A level)

Summary

Cette vidéo montre comment réaliser une expérience pratique essentielle au niveau A, qui consiste à tester la résistance des bactéries aux antibiotiques. En utilisant la technique aseptique pour éviter toute contamination, l'expérience guide les étapes de préparation d'une boîte de Petri avec de l'agar et d'une culture bactérienne, suivies de l'ajout de disques d'antibiotiques. Après une incubation, les zones de non-croissance autour des disques indiquent l'efficacité des antibiotiques. L'objectif est d'analyser quel antibiotique empêche le mieux la croissance des bactéries en mesurant les zones de diffusion des antibiotiques.

Takeaways

• 😀 La technique aseptique est essentielle pour éviter la contamination croisée entre les cultures bactériennes et l'environnement de laboratoire.
• 😀 On commence le processus en préparant une boîte de Petri stérile, sur laquelle on inscrit la date et les initiales, en utilisant la base pour éviter la contamination.
• 😀 Il est crucial d'utiliser des outils stériles, comme des pipettes Pasteur, pour ajouter la suspension bactérienne au milieu d'agar en fusion.
• 😀 Le processus implique de chauffer le goulot des bouteilles de culture pour tuer les bactéries potentielles présentes sur la surface.
• 😀 Après avoir ajouté la suspension bactérienne, il est important de ne pas secouer le mélange d'agar, mais de le rouler doucement pour éviter les bulles d'air.
• 😀 Une fois l'agar mélangé avec les bactéries, on verse ce mélange dans la boîte de Petri et on laisse l'agar se solidifier.
• 😀 Des disques d'antibiotiques sont utilisés pour tester la résistance bactérienne. Chaque disque est imprégné d'un antibiotique différent.
• 😀 Les disques d'antibiotiques sont placés dans l'agar inoculé à l'aide de pinces stérilisées, et le processus se fait dans des conditions aseptiques.
• 😀 Après avoir placé les disques d'antibiotiques, il est important de stériliser à nouveau les pinces pour éviter la contamination croisée.
• 😀 Une fois les disques en place, le couvercle de la boîte est scellé à l'aide de ruban adhésif pour éviter qu'il ne se détache durant l'incubation.
• 😀 Les boîtes de Petri doivent être incubées à 20°C pendant 48 heures pour observer la croissance des bactéries et l'efficacité des antibiotiques, mesurée par la taille des zones d'inhibition autour des disques.

Q & A

Pourquoi est-il nécessaire d'utiliser une technique aseptique dans cette expérience?

La technique aseptique est essentielle pour éviter la contamination de la culture bactérienne par des bactéries externes et pour protéger le laboratoire et l'expérimentateur des risques d'infection, car les microbes peuvent être dangereux.

Comment s'assure-t-on que les instruments utilisés sont stériles?

Les instruments comme le pipette, les forceps et les bouteilles sont stérilisés par flamme ou par immersion dans de l'éthanol avant de les utiliser, afin de tuer les bactéries présentes et prévenir la contamination.

Pourquoi faut-il faire attention à la température de l'agar avant de l'utiliser?

L'agar ne doit pas être trop chaud pour ne pas tuer les bactéries, mais il ne doit pas être trop froid non plus, car il commencerait à se solidifier et à ne pas se mélanger correctement avec les bactéries.

Quelle est l'importance de marquer le fond du Petri dish avec des initiales et la date?

Cela permet d'identifier facilement le contenu du plat en cas de perte du couvercle et d'assurer une bonne gestion des cultures dans un laboratoire microbiologique.

Que signifie le terme 'inoculer' dans le contexte de cette expérience?

'Inoculer' signifie ajouter des bactéries à une culture ou un milieu de culture, comme l'agar, afin que les bactéries puissent se multiplier et être testées, comme dans l'analyse de la résistance aux antibiotiques.

Pourquoi est-il important de ne pas secouer l'agar après y avoir ajouté les bactéries?

Secouer l'agar créerait des bulles d'air qui pourraient perturber la croissance uniforme des bactéries et affecter les résultats de l'expérience.

Comment fonctionne un disque de test d'antibiotique dans cette expérience?

Les disques de test d'antibiotiques sont imbibés d'antibiotiques spécifiques et sont placés sur l'agar. L'antibiotique diffuse lentement dans l'agar, inhibant la croissance des bactéries autour du disque, ce qui crée une zone de clarté.

Pourquoi faut-il laisser l'agar refroidir avant de l'incuber?

Laisser l'agar refroidir permet de s'assurer qu'il ne tue pas les bactéries. De plus, il doit atteindre une température qui permet une croissance bactérienne optimale sans compromettre leur survie.

Qu'est-ce qu'une zone de clarté et pourquoi est-elle importante?

Une zone de clarté est une zone autour d'un disque d'antibiotique où les bactéries n'ont pas pu croître. Elle indique que l'antibiotique a tué ou inhibé la croissance des bactéries, ce qui permet d'évaluer son efficacité.

Que peut-on conclure d'un test de résistance aux antibiotiques?

En mesurant le diamètre des zones de clarté autour des disques d'antibiotique, on peut déterminer quel antibiotique est le plus efficace contre la souche bactérienne testée.