Prácticas de Microbiología. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias. Vídeo 8

SAVUNISEVILLA

11 Sept 201409:37

Summary

TLDREl transcripto describe un método para identificar bacterias Gram-negativas utilizando pruebas bioquímicas en micro tubos. Se explica el proceso de inoculación y la incubación a 37 grados durante 24 horas. Las pruebas incluyen la detección de enzimas y la utilización de diferentes sustratos, como citrato y azúcares, para diferenciar a las bacterias. Los resultados se interpretan mediante cambios de color y se relacionan con un código numérico para identificar la especie bacteriana, proporcionando información sobre su identificación y características bioquímicas.

Takeaways

🔬 Las pruebas bioquímicas son utilizadas para identificar bacterias gram-negativas.
🧫 Se emplean micro tubos en una galería App y 20, diseñados específicamente para la identificación de enterobacterias y bacterias relacionadas.
💧 Antes de la inoculación, se añade agua a los alveolos de la base de la galería y se retira el exceso de agua.
🌡 Se inicia la identificación a partir de un cultivo en curva y se prepara una suspensión bacteriana en solución salina para inocular en los tubos.
🚫 En los tubos VP help y FIT, la suspensión bacteriana también se añade a la cúpula.
🔴 En tubos como H2S y Ure, se rellena la cúpula con parafina líquida para crear condiciones anóxicas.
🌡 Las pruebas bioquímicas se realizan a 37 grados centígrados durante 24 horas para observar los resultados.
🟡 La presencia de β-galactosidasa y β-glucuronidasa se determina mediante la observación del cambio de color del medio a amarillo.
🟢 La utilización de citrato como única fuente de carbono se evalúa, y una subida de pH indica una reacción positiva, con el indicador de pH cambiando a azul.
⚫️ La producción de gas硫化氢(H2S) se evidencia por la aparición de un precipitado negro en el medio.
🍬 La utilización de azúcares se identifica a través de la acidificación del medio, lo que provoca un cambio de color del indicador de pH a amarillo.

Q & A

¿Para qué se realizan las pruebas bioquímicas en micro tubos?
-Las pruebas bioquímicas en micro tubos se realizan para la identificación de bacterias gram-negativas, principalmente enterobacterias y bacterias relacionadas.
¿Cuál es la función de la galería App y20 utilizada en la identificación de bacterias?
-La galería App y20 está diseñada para la identificación de enterobacterias y bacterias relacionadas, y consiste en 20 micro tubos con medio deshidratado para realizar pruebas bioquímicas específicas.
¿Cómo se prepara la suspensión bacteriana antes de inocular los tubos?
-Se parte de un cultivo de bacterias, de donde se seleccionan algunas colonias para crear una suspensión en solución salina, que luego se inoculará en cada tubo.
¿Qué se debe hacer antes de la inoculación en los tubos VP help y fit?
-Antes de la inoculación en los tubos VP help y fit, se debe añadir agua a los alveolos de la base de la galería y retirar el exceso de agua.
¿Cuál es el propósito de rellenar la cúpula con parafina líquida en ciertos tubos?
-Rellenar la cúpula con parafina líquida en tubos como H2S y Ure se hace para crear condiciones anóxicas dentro del tubo, lo que es necesario para ciertas pruebas bioquímicas.
¿Cómo se interpretan los resultados de la prueba beta-galactosidasa (BGAL)?
-En la prueba beta-galactosidasa, un color amarillo indica una reacción positiva, lo que sugiere que la bacteria produce la enzima, mientras que una reacción negativa se manifiesta como incoloro.
¿Qué indica un color rojo en la prueba de hidrolisis de urea (Urease)?
-Un color rojo en la prueba de hidrolisis de urea indica una reacción positiva, lo que significa que la bacteria posee las enzimas necesarias para degradar la urea.
¿Cómo se determina si una bacteria puede utilizar citrato como única fuente de carbono?
-Se investiga mediante la prueba de utilización de citrato, donde una subida de pH que hace que el indicador azul de bromo timol se vuelva color azul indica una reacción negativa, mientras que una utilización positiva se manifiesta por un color verde pálido o amarillo.
¿Qué sucede si una bacteria realiza respiración anaerobia en la prueba de H2S?
-Si una bacteria realiza respiración anaerobia y utiliza sulfato sódico como aceptor final de electrones, se generará un precipitado negro, lo que indica una reacción negativa.
¿Cómo se interpreta el resultado de la prueba de gelatinización (Gel)?
-En la prueba de gelatinización, si la bacteria degrada la gelatina, se libera un pigmento negro que se difunde por el medio, lo que indica una reacción positiva. En caso contrario, si no se difunde, la reacción es negativa.
¿Qué pasos se siguen para leer las pruebas que requieren revelado después de la incubación?
-Para las pruebas que requieren revelado, como la cda y la nd, se añaden ciertos reactivos a la galería después de incubarla, y se observan los cambios de color para interpretar los resultados.
¿Cómo se determina si una bacteria tiene la capacidad de reducir nitrato a nitrito o a nitrógeno molecular?
-Se realiza la prueba de reducción de nitratos, donde se añade ácido sulfúrico y alfa naftilamina al tubo. Si aparece un color rojo, la bacteria tiene nitrato reductasa. Si se añade polvo de zinc y el tubo se mantiene amarillo, indica la presencia de nitrógeno molecular, lo que sugiere que la bacteria tiene ambas enzimas, nitrato y nitrito reductasa.
¿Qué hace la prueba de oxidasa (Ox) para determinar si una bacteria tiene citocromo oxidasa?
-En la prueba de oxidasa, se añade una gota de tetra metil parafenilendiamina sobre una colonia crecida. Si da un color púrpura antes de 20 minutos, la reacción es positiva, lo que indica la presencia de citocromo oxidasa en la bacteria.
¿Cómo se interpreta el resultado final de las pruebas bioquímicas para la identificación de la bacteria?
-Se rellena el papel del API 20 con las pruebas bioquímicas realizadas, y se calcula un número de siete dígitos basado en los resultados positivos de las pruebas. Este número se utiliza para buscar en un libro de claves y determinar a qué especie bacteriana pertenece la bacteria en cuestión.

Outlines

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🔬 Identificación de bacterias mediante pruebas bioquímicas

Este párrafo explica el proceso de identificación de bacterias gram-negativas a través de pruebas bioquímicas en micro tubos. Se utiliza una galería de 20 tubos diseñada para la identificación de enterobacterias y bacterias relacionadas. Antes de la inoculación, se añade agua a los alveolos de la base de la galería. Se prepara una suspensión de colonias bacterianas en solución salina y se inoculará cada tubo con esta suspensión. Algunos tubos, como los llamados VP help y FIT, reciben la suspensión bacteriana también en la cúpula. Se rellena la cúpula de otros tubos con parafina para crear condiciones anóxicas. La galería se tapa y se incuba a 37 grados durante 24 horas. Tras este tiempo, se pueden leer los resultados de las pruebas, que incluyen la presencia de beta-galactosidasa, la actividad de enzimas como la arginina de hidrólisis, la lisina de carboxilasa y la urea. Se observan también la capacidad de crecimiento con citrato como fuente de carbono, la respiración anaerobia y la degradación de gelatinas y azúcares, lo que afecta el pH y se evidencia con indicadores de color.

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🌡 Análisis de resultados y pruebas adicionales

En este párrafo se describen las pruebas adicionales y cómo se leen los resultados una vez incubada la galería. Se mencionan pruebas que requieren revelado, como la CDA, la prueba de indol (N/D) y la de Voges-Proskauer (VP), que determinan si la bacteria degrada el triptófano y si lleva a cabo una fermentación de tipo útil. Se explica la prueba de reducción de nitrato a nitrito y posteriormente a nitrógeno molecular, y cómo se leen los resultados con la ayuda de reactivos. También se menciona la prueba de oxidasa (OX), que no se realiza en la galería pero se describe el procedimiento. Finalmente, se explica cómo se rellena el papel del API 20 con los resultados de las pruebas, se calculan los dígitos resultantes y se buscan en un libro de claves para identificar la especie bacteriana. Si no hay al menos tres pruebas directas positivas, se sugiere incubar la galería otras 24 horas a 37 grados.

Mindmap

Keywords

💡Pruebas bioquímicas

Las pruebas bioquímicas son métodos utilizados para identificar bacterias a través de la observación de sus capacidades enzimas y metabolismo. En el guion, estas pruebas son fundamentales para la identificación de bacterias gram-negativas, empleando técnicas específicas en micro tubos para revelar características únicas de las especies bacterianas.

💡Bacterias gram-negativas

Las bacterias gram-negativas son un grupo de bacterias que no retienen el colorante de Gram durante el proceso de tinción. En el contexto del video, se utilizan pruebas bioquímicas para diferenciarlas y identificarlas, lo que es crucial para el diagnóstico y tratamiento de infecciones.

💡Galería de micro tubos

La galería de micro tubos es una herramienta diseñada para realizar múltiples pruebas bioquímicas simultáneamente. En el guion, se menciona que esta galería está compuesta de 20 micro tubos, cada uno con un medio deshidratado específico para la identificación de enterobacterias y bacterias relacionadas.

💡Suspensión bacteriana

La suspensión bacteriana se refiere a una mezcla de bacterias disueltas en un líquido, como solución salina. En el script, se indica que se prepara una suspensión a partir de cultivos bacterianos para inocular en los tubos de la galería, lo que es esencial para la realización de las pruebas bioquímicas.

💡Condiciones anóxicas

Las condiciones anóxicas son aquellas en las que la presencia de oxígeno es mínima o nula. En el video, se menciona el uso de parafina líquida en la cúpula de ciertos tubos para crear un ambiente anóxico, necesario para determinar si la bacteria puede realizar procesos metabólicos sin oxígeno.

💡Indicadores de pH

Los indicadores de pH son compuestos químicos que cambian de color en respuesta a cambios en la acidez o alcalinidad de una solución. En el guion, se utilizan indicadores de pH para detectar la presencia de enzimas que alteran el pH, lo cual es crucial para la identificación de las bacterias.

💡Uso de azúcares

El uso de azúcares por parte de las bacterias se refiere a su capacidad para metabolizar diferentes tipos de azúcares como fuente de energía. En el video, se evalúa esta capacidad a través de la acidificación del medio, lo que indica la fermentación y, por ende, la identificación de la bacteria.

💡Revelado de pruebas

El revelado de pruebas es el proceso de desarrollo de resultados en pruebas bioquímicas, que a menudo requiere la adición de reactivos adicionales. En el guion, se describe cómo, después de incubar la galería, se añaden reactivos específicos para leer pruebas como la de indol (ID) y la de Voges-Proskauer (VP).

💡API 20E

El API 20E es un sistema de identificación bacteriana que utiliza una serie de pruebas bioquímicas estándar para identificar especies bacterianas. En el script, se menciona que los resultados de las pruebas se utilizan para rellenar el papel del API 20E, que a su vez ayuda a determinar la especie bacteriana.

💡Nitrato reductasa

La nitrato reductasa es una enzima que cataliza la reducción de nitrato a nitrito. En el video, se prueba la presencia de esta enzima para identificar a la bacteria, ya que la reducción de nitrato a nitrito indica la presencia de nitrato reductasa, lo cual es útil para la clasificación bacteriana.

Highlights

Pruebas bioquímicas utilizadas para la identificación de bacterias gram-negativas.

Uso de micro tubos en una galería App y 20 para la identificación de enterobacterias y bacterias relacionadas.

Galería diseñada con 20 micro tubos, cada uno con medio deshidratado para realizar pruebas bioquímicas específicas.

Inoculación de tubos con una suspensión bacteriana a partir de cultivos en curvas.

Añadido de agua a los alveolos y la inoculación de cada tubo con la suspensión bacteriana.

Excepciones en los tubos VP help y FIT, donde la suspensión bacteriana también se añade a la cúpula.

Condiciones anóxicas en tubos de H2S y Urease mediante el uso de parafina líquida.

Incubación de la galería a 37 grados centígrados durante 24 horas para leer los resultados.

Investigación de la presencia de beta-galactosidasa y beta-glucuronidase mediante el uso de OLPG.

Determinación de la actividad enzimática de ADH, LD, y Ureasa a través de cambios de pH y coloración.

Prueba del uso de citrato como única fuente de carbono y su indicación en el pH mediante el indicador azul de bromotimol.

Detección de la producción de H2S a través de la formación de un precipitado negro.

Estudio de la capacidad de la bacteria para degradar la gelatina y liberar un pigmento negro.

Utilización de azúcares por la bacteria y su indicación a través de la acidificación del medio y cambios de color del indicador.

Pruebas adicionales que requieren revelado con reactivos específicos después de la incubación.

Prueba de la producción de indole por la bacteria mediante el uso de reactivo de Kovács.

Determinación de la fermentación de L-arabinosa a través de la prueba de VP (Borges-Proskauer).

Prueba de reducción de nitratos y su indicación mediante la adición de ácido sulfúrico y alfa naftilamina.

Comprobación de la presencia de las enzimas nitrato y nitrito reductasa para determinar la reducción de nitrato a nitrógeno molecular.

Prueba de oxidasa (OX) para determinar la presencia de citocromo oxidasa en la bacteria.

Uso del sistema API 20 para correlacionar los resultados de las pruebas bioquímicas y la identificación de la especie bacteriana.

Proceso de interpretación de los resultados y su traducción a un código numérico para la identificación de la bacteria.

Necesidad de incubar la galería adicionalmente si no se obtienen al menos tres pruebas directas positivas.