Electroforesis en Gel de Poliacrilamida para Proteínas

Summary

En este video, el Dr. Miguel Hernández, becario mexicano en University College London, explica detalladamente el proceso de la electroforesis en gel, una técnica utilizada para separar proteínas según su peso molecular. A lo largo del video, demuestra paso a paso cómo preparar las muestras, utilizar los reactivos y cargar el gel en la cámara de electroforesis. También explica la importancia del marcador de peso molecular y cómo interpretar los resultados obtenidos en el gel, destacando las bandas de proteínas y sus tamaños. Un video educativo para quienes deseen aprender sobre esta técnica fundamental en biología molecular.

Takeaways

• 😀 La electroforesis en gel es una técnica utilizada para separar proteínas según su peso molecular mediante el uso de una carga eléctrica.
• 😀 Para realizar la electroforesis, se necesita una proteína, una sustancia desnaturalizante, un gel preparado, un buffer y un marcador de peso molecular.
• 😀 Las proteínas se mezclan con la sustancia desnaturalizante en un volumen específico y se calientan a 100°C durante 5 minutos para desnaturalizarlas.
• 😀 El gel utilizado en la electroforesis tiene una concentración del 12% de poliacrilamida y se coloca entre dos placas de vidrio o plástico dentro de la cámara de electroforesis.
• 😀 El marcador de peso molecular se carga primero en el gel para ayudar a identificar el tamaño de las proteínas de la muestra.
• 😀 Las muestras de proteínas desnaturalizadas se cargan en los pozos del gel, usando una pipeta para asegurar un volumen exacto de 20 microlitros por muestra.
• 😀 La cámara de electroforesis se conecta a una fuente de poder, y el gel se corre a 200V durante 40 minutos para separar las proteínas.
• 😀 Durante el proceso de electroforesis, es importante observar la aparición de burbujas en el gel, lo que indica que la carga eléctrica está funcionando correctamente.
• 😀 Después de correr el gel, se utiliza un tinte (Instant Low) para revelar las bandas de proteínas, que indican la presencia de proteínas separadas por tamaño.
• 😀 El gel se deja en movimiento constante durante 12 horas para mejorar la visualización de las bandas, lo que permite una mejor interpretación de los resultados.
• 😀 Al final del proceso, el gel se enjuaga para fijar las bandas de proteína y se compara con el marcador de peso molecular para identificar proteínas según su tamaño.

Q & A

¿Qué es la electroforesis en gel?

La electroforesis en gel es una técnica de laboratorio utilizada para separar proteínas según su peso molecular, utilizando una carga eléctrica que hace que las proteínas se desplacen a través de un gel. Las proteínas más pequeñas se mueven más rápido que las más grandes.

¿Cuál es la función de la sustancia desnaturalizante en el proceso?

La sustancia desnaturalizante sirve para desestructurar las proteínas, rompiendo sus estructuras terciarias y cuaternarias, y dejando las proteínas en su forma primaria para que puedan ser separadas eficazmente en el gel.

¿Por qué es importante utilizar un marcador de peso molecular?

El marcador de peso molecular es crucial porque contiene proteínas de tamaños conocidos. Esto ayuda a identificar el tamaño de las proteínas en nuestras muestras, comparándolas con las bandas del marcador.

¿Cómo se prepara el gel de electroforesis?

El gel se prepara con una concentración específica de poliacrilamida (12% en este caso), y se coloca entre dos placas de vidrio o plástico. Luego, se retira una peineta que crea los pozos donde se cargarán las muestras y el marcador.

¿Qué ocurre durante la electroforesis?

Durante la electroforesis, se aplica una corriente eléctrica que hace que las proteínas cargadas se desplacen a través del gel. Las proteínas más pequeñas se mueven más rápido hacia el polo positivo, mientras que las más grandes se mueven más lentamente.

¿Cómo se cargan las muestras en el gel?

Las muestras y el marcador de peso molecular se cargan en los pozos del gel utilizando una micropipeta. Las muestras se mezclan previamente con la sustancia desnaturalizante y luego se calientan antes de ser cargadas.

¿Por qué es necesario calentar las muestras antes de cargarlas en el gel?

El calentamiento a 100°C durante 5 minutos es necesario para completar la desnaturalización de las proteínas, lo que garantiza que se separen correctamente en el gel durante la electroforesis.

¿Qué se debe hacer después de correr la electroforesis?

Una vez completada la electroforesis, el gel se revela utilizando un reactivo como Instant Blue. Este reactivo tiñe las proteínas y permite visualizar las bandas. El gel debe ser lavado y dejado en movimiento constante durante un tiempo para obtener un resultado claro.

¿Qué indican las bandas que se ven en el gel después del revelado?

Las bandas en el gel representan proteínas separadas según su peso molecular. La primera banda corresponde al marcador de peso molecular, y las demás bandas corresponden a las proteínas en las muestras, que se separan de acuerdo a su tamaño.

¿Qué sucede si el gel no se prepara correctamente?

Si el gel no se prepara adecuadamente (por ejemplo, si tiene impurezas o no se quita la banda de impureza antes de usarlo), la electroforesis no se realizará correctamente, y los resultados podrían ser confusos o poco precisos, afectando la separación de las proteínas.